jiaoyang1978 蛋白质中有6个半胱氨酸，随机形成3个二硫键的方式有多少种？selleckchem01 这个不能用概率论来算的吧~jiaoyang1978 不是作实验什么的，是课后题，答案是30，不知道怎么算的，故求解法。dlzhangyu 就是用排列组合算的嘛，二硫键的形成需要两个半胱氨酸的残基上的硫原子，实际上类似这样，你画一个圆圈，上面有六个点，问连成三条线的方法有几种。那么你随便选一个点，连接另外一个点，有5种方 ...

冰之鱼 如题： 肿瘤原发灶肿瘤细胞和转移灶肿瘤细胞的细胞活性是否完全一样？有哪些指标可以评价？另外，体现肿瘤细胞特性的指标有哪些？比如增殖周期什么的。我对这方面了解的少，一时也不知道看什么资料， 请帮忙推荐本书看，谢谢~~冰之鱼 有没有人给回答一下啊？冰之鱼 怎么没人管，没人问啊，自己顶！！！！！！！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

zhao7253 我想在肺组织做药物抑制平滑肌细胞增殖的细胞周期检测，药物作用于微管导致细胞复制停止于G0/G1和G2/M期，怎么选择周期蛋白呢？此药物能稳定已聚合的微管和增强微管的装配，因此导致细胞复制大部分在G0/G1 和 G2/M期受到抑制，急！！！！！！！！！！！！！！谢谢zhao7253 要能做WB和PCR的，谢谢！！！！！zhao7253 谢了 我再研究下本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以 ...

dxm2005128210 求助怎样大批冻存细胞并复苏因为我的实验要一次性冻存10的8次方至9次方数量级的原代提取细胞，可是每个冻存管里细胞数要控制在10的6次方至7次方，也就是一次要冻存十几或二十管细胞。然后要同时复苏这些细胞，在复苏的过程中，细胞管数太多，全部复苏的时间也很长，以至于离心细胞悬液的时候出现大团的絮状物，考虑可能是细胞死亡，细胞内的核酸、蛋白等物质释放出来。那团絮状物吹不散，最后计数仅获得冻存前 ...

pljj2046 各位高手，小弟想根据基因来查询其所对应的microRNA,请问用什么工具啊？TargetScan用不成了吧？**赐教~~~pljj2046 大家元宵吃完了给我讲讲啊~~~pljj2046 高手们快出现啊~~~帮帮忙啊本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

konglingrufeng 之前实验设计A组 小鼠成骨前体细胞（MC3T3-E1)+阳性诱导剂+培养基B组 小鼠成骨前体细胞（MC3T3-E1)+实验诱导剂+培养基C组 小鼠成骨前体细胞（MC3T3-E1)+阳性诱导剂+实验诱导剂+培养基D组 小鼠成骨前体细胞（MC3T3-E1)+培养基诱导相同天数后在免疫荧光结合共聚焦显微镜技术下，半定量测定OPG/RANKL表达，差异有统计学意义问题1.接下来，能选择一条通路，加阻断剂，然后还是用免疫荧 ...

yanjing2001 我用药物处理细胞后，流式检测细胞周期，G1期增加，S期减少，G2基本没有什么变化问题一：这是说明药物把细胞阻滞在G1期吗？问题二：把细胞阻滞在G1期与G1/S期阻滞是相同的意思吗？问题三：想进一步通过western blot 检测cyclin确定G1期阻滞，应该检测cyclin d,还是cyclin d1呢，为什么请大家帮忙！sunzhihong490 1.这的看你的细胞组织在G1起的百分比了，随着药物浓度的增加 ...

zhuhuachao 请问各位战友， western-blot法测得的结果是你所要检测蛋白的总蛋白还是只包括游离的蛋白？或者说该目标蛋白与其他蛋白结合以后，western-blot法结果上是否有所反应？amygdala 一般来说，western blot检测到的是包括游离态和聚合态的总蛋白，目标蛋白与其他蛋白结合的情况下也能检测出来。能否检测取决于抗体的识别位点是否存在，通常情况下目标蛋白的抗体识别位点不会受其形成复合物影 ...

wzmclf 各位，谁有NF-kB参于凋亡途径这方面的图，急用。谢谢有的话能给我一份吗chenyumei_ttkj Nuclear factor kB (NF-kB) is a nuclear transcription factor that regulates expression of a large number of genes that are critical for the regulation of apoptosis, viral replication, tumorigenesis, inflammatio ...

lesenhower 想到一个问题：体外切断了正常的血供，器官的营养交换取决于简单的灌流。对于血管有畸形的器官，体内会因血供不足发育异常；如果将该器官放在体外培养，由于不依赖血管了，而直接由培养基灌流提供营养，是否就不会存在“血供不足”的问题了，所以反而可能发育正常了？换个说法，对于体外培养的器官，其内部血管是否存在，正常与否还有区别吗？有没有人能给这个问题以确切的答案？谢谢！孤单走着 版主太小气，2叮当，过年啦！整个50叮当。 ...

wliangl 求助各位达人，谁能帮忙分析一下这个问题：使用mCherry质粒（红色荧光质粒）在24孔板转染血管内皮细胞。三天后使用Nikon的荧光显微镜，Texas Red滤镜系统观察：阴性对照（未进行转染，直接培养）和转染细胞同时出现红色荧光，强度相当，转染组全部细胞都出现红色荧光，对照组部分细胞出现，部分细胞较弱，目测感觉全都不像红色荧光表达。问题排除：1. 使用其他滤镜系统没有荧光（GFP，DAPI，CY5）2. 孔板其他孔和 ...

wltxj 求助：为什么转膜后会曝出GST的条带来，请高手指教! 多谢xindu19881988 是不是本身应该是融合蛋白的，但是会有GST单体存在？我也是这样，不知道为什么。xinyinhancidian 如果是这张胶上GST及其融合蛋白进行转膜，Western blot肯定会有非特异性条带，因为上样量太大了。做GSTpull down之前有必要对自己使用的GST融合蛋白的量做一个定量。纯化GST融合蛋白时，有些容易降解的蛋白质会 ...

nedvedtnt 请问各位高手，有没有构建过表达磷酸化ERK1/2的质粒？因为我所要验证的通路是对ERK1/2磷酸化的抑制作用，必须要一个能够过表达磷酸化ERK1/2的质粒进行干预，请问能否构建这样的质粒？liubingood 表达磷酸化ERK1/2的质粒倒是没听说过，但是ERK1/2的质粒应该是有的。我们曾经构建过akt的强制表达质粒。为何要表达呢？可以采用一定的刺激因子使磷酸化ERK1/2表达升高，再用你的因素处理 ...

zhuzhu007 请问在做细胞免疫荧光时，用Tween20打孔，也就是做细胞通透的时候，浓度是多少？rongjiansu 这个要靠实验去摸索，一般用0.1% 的浓度处理5－10分钟不等。做微管最多可以用到10%。关于如何优化，Nature protocol上面有一篇文章，专门讲免疫荧光实验条件的优化zhuzhu007 rongjiansu wrote:这个要靠实验去摸索，一般用0.1% 的浓度处理5－10分钟不等。做微管最多可以用到10%。关 ...

新手上路多包涵 在网上查了一些资料看，但还是不大明白，请教高手们提供点资料学习学习。另外这个东西，现在研究的热么?呵呵。谢谢rongjiansu 對話的英文為cross talk，指的是不同信號通路間的相互作用，通常是關鍵的調控分子特別是Kinase之間的相互作用，一直是細胞生物學研究的熱點問題。另外還有convergence和disperse，是信號通路三大特性。liubingood rongjiansu wrote:對話的英 ...

狼伟人坯子 由于课题需要，需要做乳腺癌方面的通路研究，思路问题想和大家探讨一下，希望大家多多指正：1. 某个细胞因子（暂且定义为A）的siRNA干扰48h后，提RNA和Pr，检测细胞膜上某个蛋白（暂且定义为B）的表达水平变化（前期实验结果表明，RNA水平下调，蛋白水平还未做）2. A siRNA 干扰48小时后 提蛋白 做PI3K/Akt，NF-kB的总蛋白和磷酸化水平的WB3. A siRNA 干扰48小时后，NF-kB与蛋白B启动子的双荧光素梅报告系统或 ...

thisiscc 目前仅知道能用GFP做成融合蛋白，并在显微镜下观察，但也不了解更多细节。有熟悉这方面的，能提供一些研究方法，和技术细节不。能告诉哪些相关Publication也行。不甚感激。thisiscc 忘了说了，主要是想看目标蛋白在细胞质与细胞核的分布情况，及其在一定条件下的变化。Thanks again.rongjiansu 免疫荧光法观察处理前后目标蛋白在细胞中的分布，不过抗体的细胞内定位一般不准，不太可靠构建GFP ...

薇安夕夕宝 请问有人了解SHH通路吗？这个通路有激动剂吗？acola SAG C28H28ClN3OS黑糊糊2000 Oxysterols, could be one but not sure can be used for all the cell lines本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

xiaoerlong 求“体内培养”定义lightningwing 能否说的详细些，是抗体这类的体内培养，还是生物医学工程相关的体内培养？xiaoerlong 生物医学工程相关的体内培养（细胞培养方面的）xiaoerlong lightningwing wrote:能否说的详细些，是抗体这类的体内培养，还是生物医学工程相关的体内培养？生物医学工程相关的体内培养xxsl_2007 还真不好回答。体内培养是在动物体内生产所需物质的方法，如 ...

beyond211 不知TGF-β 在培养液里的半衰期是多久，如果我要持续刺激72小时，请问期间是否需要换液并换上新的TGF-β ？slimmerchan 我的经验是不需要，不过到第三天可以看到一些漂浮的死细胞sesame0415 我是在48小时后换液的，在相关文献中看到的…本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming