【求助】求高人帮忙分析一下细胞荧光的问题,万分感谢!
丁香园论坛
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求助各位达人,谁能帮忙分析一下这个问题:
使用mCherry质粒(红色荧光质粒)在24孔板转染血管内皮细胞。三天后使用Nikon的荧光显微镜,Texas Red滤镜系统观察:阴性对照(未进行转染,直接培养)和转染细胞同时出现红色荧光,强度相当,转染组全部细胞都出现红色荧光,对照组部分细胞出现,部分细胞较弱,目测感觉全都不像红色荧光表达。
问题排除:
1. 使用其他滤镜系统没有荧光(GFP,DAPI,CY5)
2. 孔板其他孔和培养液没有荧光。
3. 未分到孔板的细胞(培养瓶中的细胞)没有荧光。
4.不会是转染错误,因为转染后细胞状态较差,而且当时确定只转染了一个孔,其余5个阴性对照孔全都出现红色荧光。
5.阴性对照细胞状态很好,没见到大量死亡细胞,没有染菌。
所有孔唯一相同的是在转染后同时换过液,使用的是Lonza的EBM-2内皮培养液,购买了成品的配套supplement(包括EGF,VEGF,IGF-1,Heparin,Vc,bFGF,5% FBS, GA-1000)。
问题:
1 荧光来源是自发荧光么?有没有可能是培养液中的各种情况导致细胞发生荧光?
2 细胞什么情况下会自发产生红色荧光?
使用mCherry质粒(红色荧光质粒)在24孔板转染血管内皮细胞。三天后使用Nikon的荧光显微镜,Texas Red滤镜系统观察:阴性对照(未进行转染,直接培养)和转染细胞同时出现红色荧光,强度相当,转染组全部细胞都出现红色荧光,对照组部分细胞出现,部分细胞较弱,目测感觉全都不像红色荧光表达。
问题排除:
1. 使用其他滤镜系统没有荧光(GFP,DAPI,CY5)
2. 孔板其他孔和培养液没有荧光。
3. 未分到孔板的细胞(培养瓶中的细胞)没有荧光。
4.不会是转染错误,因为转染后细胞状态较差,而且当时确定只转染了一个孔,其余5个阴性对照孔全都出现红色荧光。
5.阴性对照细胞状态很好,没见到大量死亡细胞,没有染菌。
所有孔唯一相同的是在转染后同时换过液,使用的是Lonza的EBM-2内皮培养液,购买了成品的配套supplement(包括EGF,VEGF,IGF-1,Heparin,Vc,bFGF,5% FBS, GA-1000)。
问题:
1 荧光来源是自发荧光么?有没有可能是培养液中的各种情况导致细胞发生荧光?
2 细胞什么情况下会自发产生红色荧光?
背底噪声的可能性大啊,发上图片来看看再说。
后面,你是怎么解决问题的?我也遇到这个问题,感觉是红细胞自发光(自发红光),希望前辈指导
惊涛骇浪080
后面,你是怎么解决问题的?我也遇到这个问题,感觉是红细胞自发光(自发红光),希望前辈指导
是不是正常发光 看看细胞形态就行
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