【求助】磷酸化ERK1/2的过表达
丁香园论坛
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请问各位高手，有没有构建过表达磷酸化ERK1/2的质粒？
因为我所要验证的通路是对ERK1/2磷酸化的抑制作用，必须要一个能够过表达磷酸化ERK1/2的质粒进行干预，请问能否构建这样的质粒？
因为我所要验证的通路是对ERK1/2磷酸化的抑制作用，必须要一个能够过表达磷酸化ERK1/2的质粒进行干预，请问能否构建这样的质粒？
表达磷酸化ERK1/2的质粒倒是没听说过，但是ERK1/2的质粒应该是有的。我们曾经构建过akt的强制表达质粒。为何要表达呢？可以采用一定的刺激因子使磷酸化ERK1/2表达升高，再用你的因素处理即可，这样不就省事了吗？
liubingood wrote:
表达磷酸化ERK1/2的质粒倒是没听说过，但是ERK1/2的质粒应该是有的。我们曾经构建过akt的强制表达质粒。为何要表达呢？可以采用一定的刺激因子使磷酸化ERK1/2表达升高，再用你的因素处理即可，这样不就省事了吗？
确实是个办法，这样就不需要构建质粒了。
可是，是否有特异性的刺激ERK1/2磷酸化的刺激因子呢？怕的就是非特异性的刺激因子对其他的干扰。
不知道你用的细胞体系是什么样的，是否已知表达某种受体？一般来说，用大部分受体的激动剂都可以激活下游的ERK信号。或者用foskolin, PMA等蛋白激酶的激活剂也能达到这个效果。
amygdala wrote:
不知道你用的细胞体系是什么样的，是否已知表达某种受体？一般来说，用大部分受体的激动剂都可以激活下游的ERK信号。或者用foskolin, PMA等蛋白激酶的激活剂也能达到这个效果。
磷酸化在ERK1/2质粒不能构建，因为磷酸化蛋白在修饰，这在基因水平上是不能体现的。考虑下别在方法，通路激动剂等，不过也要考虑细胞毒性在问题。
请问你后来构建载体了吗
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