过表达质粒构建

过表达质粒构建时扩增目的基因总扩出不来是什么原因呢？我用了两种高保真的Tag酶都没有扩出来，做了GAPDH的阳性对照也没有扩出来，是cDNA有问题吗，可是我用的四种细胞系的混合cDNA，不至于一点都扩不出来呀？？？？