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【求助】siRNA PI3K/Akt NF-KB 膜蛋白

丁香园论坛

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由于课题需要,需要做乳腺癌方面的通路研究,思路问题想和大家探讨一下,希望大家多多指正:
1. 某个细胞因子(暂且定义为A)的siRNA干扰48h后,提RNA和Pr,检测细胞膜上某个蛋白(暂且定义为B)的表达水平变化(前期实验结果表明,RNA水平下调,蛋白水平还未做)
2. A siRNA 干扰48小时后 提蛋白 做PI3K/Akt,NF-kB的总蛋白和磷酸化水平的WB
3. A siRNA 干扰48小时后,NF-kB与蛋白B启动子的双荧光素梅报告系统或者ChIP
3. PI3K阻断剂和Akt阻断剂分别预处理30min后,A siRNA 干扰48小时后,提RNA和蛋白,检测蛋白B的表达水平。

请各位老师多多拍砖。。。谢谢。。。
另外,大家有没有做过或听过siRNA共转染啊? siRNA和质粒共转染我倒是知道,可是做siRNA共转染的文献没见过。大家有没有做过或者看到过的?
你好,你那有抑制PI3K激酶的siRNA?能告诉我在哪个公司订的吗?是否能同时抑制PI3K激酶的三个亚型啊?
fffffffffffffffffffffffffffffffffffffffffffffffffffff
PI3K阻断剂和Akt阻断剂分别预处理30min

时间可能有些短,磷酸化水平可能还相当高。参考以下文献

Ubiquitin-dependent regulation of phospho-AKT dynamics by the ubiquitin E3 ligase, NEDD4-1, in the IGF-1 response.

PMID: 23195959

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