【求助】LY294002：PI3K/AKT阻断剂的问题

想请教下园子里的各位xdjm们一个问题，那就是LY294002：PI3K/AKT阻断剂的问题，LY294002是PI3K通路的阻断剂，他到底是阻断了PI3K的蛋白表达，也就是说使PI3K的蛋白得表达下降了；还是阻断了PI3K蛋白的磷酸化，说明书只是说体外培养的细胞加入该阻断剂后，可以抑制AKT的磷酸化，但是对PI3K的蛋白及其磷酸化PI3K蛋白的改变未提及。请指教。

自己顶一下啊

PI3K激酶阻断剂，竞争性结合PI3K的ATP结合位点
LY 294002 [2-(4-Morpholinyl)-8-phenyl-4 H-1-benzopyran-4-one] is a potent and specific cell-permeable inhibitor of phosphatidylinositol 3-kinases (PI 3-kinases) with IC50 values in the 1–50μM range. LY 294002 competitively inhibits ATP binding to the catalytic subunit of PI 3-kinases and does not inhibit PI 4-kinase, DAG-kinase, PKC, PKA, MAPK, S6 kinase, EGFR or c-src tyrosine kinases and rabbit kidney ATPase.

信号通路的激活大多通过磷酸化状态来实现的，抑制某种通路，可以理解为其磷酸化水平降低，具体可以通过免疫印迹看看其下游的蛋白表达是否降低了，

个人一点拙见，仅供参考

楼主提出一个很好的问题。
Y294002是常用的PI3K/AKT通路的抑制剂，如楼上所引，是通过对PI3K的竞争性抑制来抑制PI3K的酶活性，那么为什么大家常用phopho-AKT(S473)来检测呢，因为虽然众所周知Y294002可以PI3K的活性，但是没有一种磷酸化位点PI3K活性的标志读出（indicator)，所以检测PI3K的活性，一般用ｋｉｔ,　成本很高，并且还麻烦，而AKT作为PI-3K作为的下游，S473磷酸化位点就是AKT的活性的indicator，用Wesatern Blot就可以很方便的检测，所以用的非常广泛。但是对于有些AKT不依赖于PI-3K的通路，就要用别的方法（别的AKT的抑制剂或者siRNA/ShRNA等）了。

又长学问了~~~~~~

LY 294002has been shown to be a potent inhibitor of PI 3-kinase activity, acting as a competitive inhibitor for ATP binding site of the enzyme.
LY294002主要是抑制PI3K磷酸化，可以通过检测PI3K或者其下游因子的磷酸化水平来衡量其效果~如下图

LY294002主要用来抑制PI3K的活性，从而抑制PI3K磷酸化akt的反应，最终结果是pi3k以及akt的含量不变，但是p-akt的含量大大减小。

可否请教老师一个问题？上述这种情况，只用western 检测一下mTOR的磷酸化水平可否？