【求助】请教各位前辈们关于AKT/PKB 的问题

rarazhuzhu wrote:
谈谈我的看法

楼主想要验证细胞凋亡途径中是否有Akt/PKB参与

首先要确认你的细胞在某种刺激下是否发生凋亡，先用几个凋亡指标如：caspase-3,PARP protein或者TUNEL stain确认下。

在发生凋亡的基础上，再检测如楼主所设想的Akt mRNA水平及Akt蛋白水平表达量和Akt 磷酸化水平表达量。

如果Akt的某种水平上表达量有变化，只能说在在细胞凋亡途径中Akt参与，但不能说明Akt与细胞凋亡途径的上下游关系。

所有建议楼主使用Akt的inhibitor来证明最好。

以上是我个人一点想法，good luck!

yuanyuan_626 wrote:
谢谢rarazhuzhu的分析

凋亡指标是要做的

加inhibitor的话，对实验设计来说是更严谨，但是就是担心实验难度和周期的问题

yuanyuan_626 wrote:

我想研究一种细胞的过度凋亡是不是与AKT/PKB 下调有关，那我检测一下AKT 的 mRNA，及AKT ，P-AKT 的表达量，这样的思路有没有问题？
 

chuckdouble wrote:
Akt 作为 anti-apoptotic 信号蛋白，近几十年来被很多团队研究着。

那么，你的研究的创新点是什么？

rarazhuzhu wrote:
增加了难度 但更能说明问题

如果避开不做的话 那么等到投杂志社时 肯定要让你追加实验的 要是到这个时候才更加头疼

总之 实验中为了达到目的 即使难度大也要做，即使要花多点时间也要做，这就是变相的节约时间。

最后 祝good luck~

yuanyuan_626 wrote:

我想研究一种细胞的过度凋亡是不是与AKT/PKB 下调有关，那我检测一下AKT 的 mRNA，及AKT ，P-AKT 的表达量，这样的思路有没有问题？
 

创新点不在于Akt 而是我想研究的那个模型 现在似乎是没有人发过这类的文章，我想这也算的上是点创新吧？

没接触过实验，目前处于空想构思阶段，所以把实验想的好像有点过于简单

chuckdouble wrote:
原来是这个意思。

你想问的应该是： 我想用A模型刺激出细胞的凋亡是否与Akt有关，是吧？