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十张图带你读懂大肠杆菌

大家对大肠杆菌应该很熟悉,它是分子生物学里最常见的工程菌。基因克隆、蛋白表达,这些就是在大肠杆菌中实现的,这和大肠杆菌的结构密切相关。大肠杆菌 K12大肠杆菌是一种革兰氏阴性菌,棒状,约 2.5 微米长。有鞭毛,它的基因组由 4 639 221 个碱基对组成,至少编码 4 000 个基因。扫描电镜下的 E.coliK12 菌株最早是 1921 年从疟疾患者的粪便中分离得到,一直作为纯种保藏在实验室里,已有 75 年。大肠杆菌 K12 容易生长,并且关于它的代谢研究很多,因此它经常被用作 ...

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在 Nature 和 Science 上发表 200 篇文章的大牛

有这么一位大牛科学家,他在《 Nature》上发表了 180 篇论文, 在《Science》上发表了 53 篇论文。想不想认识一下这位大牛呢?他就是 Robert M MayRobert M May,1936 年 1 月生于澳大利亚,悉尼大学物理学博士。1972-1975 年进入美国普林斯顿高等研究院,开启生物科学领域研究。1975 年成为世界著名的生态学者。他为人类作出哪些贡献?1. 出版专著 《模型生态系统中的复杂性与稳定性》这本书于 1973 出版。在该著作中,他一反当时人们普遍的认识,提 ...

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导师眼里差劲的硕士生反而找到好工作?

记得硕士刚毕业时,大部分人的共识是差劲的硕士生往往找到好工作。 如今硕士毕业近 5 年,重新刷新了认识。何为差劲的硕士生?首先,这里的差劲绝对没有贬低的意思。其次,差劲也不是真的差生,而是特指一类硕士生。他们还挺聪明,又有点能力,但心思没全用在科研上。硕士期间,大部分时间他们不是潜心科研,而是去大公司实习,或者参加各种活动,交友广泛。因为没有花太多心思科研,所以发表的论文一般或者导师交代的任务完成得不够完美。自然,导师对他们也不 ...

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质粒提取注意事项

经常提质粒吗?熟练之后,提质粒乃至质粒构建都很简单。但如果真问起一些质粒的细节,可能很多人回答不了。不信随我看看。质粒组成要素一个合格的质粒含有以下组成部分:复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。而真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。抗生素抗性基因 可以便于加以检测,如 Amp+ 、Kan+。多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段P/E 启动子/增强子Terms 终止信号加 poly(A)信号 可以起到稳定 mRNA 作用如 ...

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科研单身狗的逆袭之路

我是一个身高 180,长得不怎么帅,身材有一些微胖,还曾 3 次被女朋友劈腿的科研单身狗。问我为什么会走上科研的道路?我只能说,当我上高中的时候,我是冲着当年流传甚广的「至理名言」:「二十一世纪是生物的时代」,才走上了生物医学的道路。那时,幻想着采用各种具有科幻色彩的技术手段,来改变自己和世人的命运。结果读了研究生和博士的时候,才发现,科研道路并没有想象中的那般美好。但此时,我也再无路可退。上研究生那会儿,由于刚进实验室,对实验一窍 ...

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检验第一课:「高敏C反应蛋白」是什么?「常规C反应蛋白」是什么?我们今天就来谈谈两个常常被混淆的概念

经常会有战友在版面上问:高敏 C 反应蛋白和常规 C 反应蛋白的区别,也有很多战友作出了较为科学的解释。但是总体来看,很多解释虽然正确,但过于「学术化」,用词太专业,导致很多战友难以理解。另一方面,我认识的很多临床医生,包括部分心内科的医生,都常常把这两个概念搞混,有时甚至让人哭笑不得。为便于大家理解这两个概念,我特地开个帖子,力争通过通俗易懂的语言来谈谈自己的看法。我不是生化专业的,只是看过一些高敏 C 反应蛋白的文献,所谈及的内容有不妥 ...

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菌落总数中的误操作及避免方法

「菌落总数」是评价食品卫生质量的重要指标,其检测工作在某种程度上具有相当的不可比性,这就要求检测人员要严格执行科学的操作程序。国家标准GB/T4789.2 中只是简要提到了检测程序,对实际操作过程中容易出现的问题未作详细说明。本人通过实践及多次对比试验,现就检测中容易出现的问题,作一阐述。样品的制备和稀释倍数的选择对于冰冻的样品,在接种前要放到0~4℃的冰箱中解冻。固体样品要用灭菌刀或镊子从不同部位采取试验材料并混合 ...

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瓷珠保藏法

1 设备与材料1.1 低温冰箱:-70℃1.2 高压灭菌器。1.3 多孔玻璃珠(或素烧瓷珠):直径2~3 mm。1.4 商业化细胞冻存管(可选)。2 操作步骤2.1 将直径为2-3 mm 的瓷珠分装到小螺旋帽瓶中(每瓶最多装30 粒)制成冷冻管,高压灭菌。2.2 标记冷冻管。2.3 在无菌状态下打开冷冻管。2.4 在所保藏菌种的最适营养条件下将细胞培养至稳定期或成熟期,进行纯度检查后,将菌株新鲜培养物加入到培养基中制成混悬液,无菌操作将混悬液转入到冷冻管中。2.5 封好冷冻管并颠倒四至五 ...

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标准菌株验证鉴定步骤

菌种活化:干粉标准菌株 标准贮备菌株 工作菌株;1.1 金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌标准菌株:挑取部分干粉溶解于0.9% 无菌氯化钠溶液中,划线接种于营养琼脂平板上,36℃±1℃ 培养18-24 小时。并观察菌落形态。a. 金黄色葡萄球菌:菌落凸起,圆形,不透明;b. 大肠埃希氏菌:菌落稍凸,圆形,湿润,乳白色;c. 铜绿假单胞菌:菌落扁平,圆形,边缘不整齐,光滑湿润,可产生蓝绿或黄绿色素;d. 枯草芽孢杆菌: 表面粗糙不透明,镜检菌体有芽孢。1.2 白色 ...

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临床尿常规检验的方法进展及评价

尿液的主要是由血液通过滤过、重吸收以及排泄后,最终产生的代谢产物。由于尿液的排出对于人体的水、酸碱以及电解质平衡均具有重要的价值,且与血液循环、器官功能、组织稳定性具有密不可分的联系,因此通过对尿液的量、性质、组成进行分析,能够有效诊断疾病。泌尿系统疾病通过尿常规检验即可准确诊断,并为医师选择适宜的治疗方法提供参考价值。传统的尿液检验方法主要可分为肉眼检查、显微镜检查以及化学检查 3 种。而随着科技的发展,尿液化学分析仪 ...

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凝血实验指标――你真的记住了?

本文来自 1凝血酶原时间(PT) 主要反映外源性凝血系统状况,其中INR常用于监测口服抗凝剂。PT是血栓前状态、DIC及肝病诊断的重要指标,作为外源性凝血系统的过筛试验,也是临床口服抗凝治疗剂量控制的重要手段(表1)。 本文来自PTA<40%提示肝细胞有大片坏死,凝血因子合成减少。如肝衰早期30%<PTA<40%;中期20%< PTA< 30%;晚期PTA<20%。表1: ACCP(美国胸科医师协会)推荐的INR目标值延长见于:a、广泛而严重的肝脏实质 ...

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6XHis 标签的特点以及它的使用方法

6xHis 标签,也称为多组氨酸标签, His6 标签或 hexa 组氨酸标签, 是一种在转染的细胞中目标蛋白的 C 端或 N 端上由至少 6 个组氨酸残基链接上所组成的氨基酸序列。这种标签通常在重组蛋白的纯化中使用,这是因为组氨酸残基的序列可以在特定的缓冲液条件下结合到几种类型固定的离子上(比如镍,钴和铜)从而达到容易检测和纯化 His 标签蛋白的目的。由于它的相对小的分子量,低的免疫原性,亲水性和在去污剂和其他添加剂存在的情况下的易变性, 因此在天然和变性的条件下 ...

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蛋白样品制备中各类杂质和杂蛋白的去除

蛋白样品制备中,在细胞破碎之后,既可以利用特定蛋白质的特性来分离某一类蛋白质,比如亲和纯化,比如前面介绍的磷酸化蛋白富集,或者膜蛋白富集;另外一个考虑方向是去除杂质----去掉样品中某些非目标高丰度蛋白或者杂质的干扰,同样可以达到简化样本的目的。当然要小心「倒洗脚水的时候别把婴儿也倒掉了」,一定要选择可靠的产品。比如,潜在疾病标志物的最好样本来源就是血清或其他体液,此类样本可以提供人蛋白质组中绝大部分组份。然而用蛋 ...

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找个生化专业的男朋友是一种怎样的体验?

俗话说男怕入错行,女怕嫁错郎。我们这个专业的,每天做实验,大家难免日久生情。该不该选他们做男朋友呢?外出吃饭生化男吃饭和别人不太一样。比如说加调料,别人都是直接倒,他是把筷子先插到碗里,然后将调料沿着筷子缓缓倒入碗中。比如说过夜的饭菜他不吃,因为亚硝酸盐超标了。如果水有异味,他要拿回所里检测一下细菌是否超标。冰牛奶一般不喝,会水浴加热一下。酸牛奶,要买新鲜的,因为久了乳酸菌都死光光了,他可以给你算出个细菌生长曲线,你 ...

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ELISA 实验问题总结

ELISA 简介酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay 简称 ELISA)是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。ELISA 过程包括抗原(抗体)吸附在固相载体上称为包被,加待测抗体(抗原),再加相应酶标记抗体(抗原),生成抗原(抗体)--待测抗体(抗原)--酶标记抗体的复合物,再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体(抗原)的量。待测抗体(抗原)的定量与有色产生成 ...

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论文写作不知从何开始?

最近一师弟和我抱怨,说是不知道该怎么开始写 SCI 论文。然后我又问他,你的实验结果够发一篇 SCI 了吗?他傻眼了。我又接着追问,你的论文适合发表在啥杂志上?哪种类型,是文章还是综述还是报告还是来信?师弟一头雾水。磨刀不误砍柴工,要清楚自己为何发论文,发啥论文,才能有针对性地写出满意的论文。写作前的准备除了开头提的,还要留意自己要投得杂志的影响因子是多少,每年发表多少文章,是否有过本土中国人在上面发表,等等。以便评价自己的文章被 ...

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大数据时代来了,检验医学何去何从

大数据技术的战略意义不在于掌握庞大的数据信息,而在于对这些含有特定意义的数据进行专业化处理。从某种程度上说,大数据是数据分析的前沿技术,是需要新处理模式才能具有更强的决策力、洞察发现力和流程优化能力的海量、高增长率和多样化的信息资产。大数据技术是从各种各样类型的数据中,快速获得有价值信息的能力。对于大数据时代,目前通常认为有下述四大基本特征,称为“四V”特征:第一,数据规模大(Volume),可称海量;第二,数据类型 ...

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定性检测项目室内质控经验交流

作者:怀化市第二人民医院 张廷华定量检测室内质控相对定性检测而言,一般会比较容易上手,很长一段时间都能让质控保持稳定状态,这是因为定量检测的质控多为纯数据化的格式,有一个确定的数字,处理起来比较方便,而且定量质控品商业化已经很成熟了,也就是说,在市场上很容易买到价格实惠,性质稳定的定量质控品,并且还有多个水平的质控品,使用起来就更为全面了。然而,定性检测就不是那么容易了,定性检测是非“0”即“1”的概念,而且定性检测质控 ...

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肝脏血液检测――ALT & AST

肝脏血液检测是最常见的血液检测,可用于评估肝脏功能或肝损伤。肝损伤检测的第一步是进行简单的血液检测,以确定血液中特定肝酶(蛋白质)的水平。目前临床上最敏感、应用最广泛的肝酶是转氨酶,包括门冬氨酸转氨酶(AST或 SGOT)和丙氨酸转氨酶 (ALT 或 SGPT)。这些酶主要存在于肝细胞内,一小部分存在于肌肉细胞内。如果肝脏受损或损坏,肝细胞中的转氨酶便进入血液,血液中ALT和AST水平升高,提示肝脏疾病信号。其他有关的肝脏血液检测 ...

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2016 最新共识:常规血脂检测不需要空腹

Clinical Chemistry 5 月 27 日在线发表了欧洲动脉粥样硬化协会和欧洲临床化学和实验医学联合会的联合共识声明:推荐常规的血脂检测并不需要空腹。传统观念中测血脂需要空腹似乎是天经地义的,那么这篇文章主要讲了什么内容呢?今天我们就学习下这篇共识,当然只是简要介绍,这篇共识的内容是非常丰富的,详细的内容建议大家阅读文献的原文。 使用空腹及非空腹标本检测血脂的主要原因多年来临床实验室测定血脂(CHOL、LDL、HDL 和 TG) ...

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