细胞技术

一、程序冻存步骤（需梯度降温）1、配置冻存液，冻存液推荐配比：55%（基础培养基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；推荐使用Procell通用血清型程序冻存液，货号PB180436；2、制备好的细胞悬液计数，计算总细胞量；3、细胞离心后尽量吸干净上清，离心转速1200rpm（250g）3min；4、加入配置好的冻存液重悬，调整细胞浓度为3×106~1×107cells/mL；5、分装入冻存管，一个冻存管 ...

免疫荧光（immunofluorescence）是一种常用的光学显微术，即用荧光显微镜来观察细胞中的特定生物分子。免疫荧光依赖于抗体抗原的特异性结合，然后通过直接标记或间接标记方法使用荧光分子指征抗体-抗原结合的位置，以确定目标生物分子在细胞中的位置、丰度和分布情况。免疫荧光实验流程1. 固定固定液种类：有机溶剂（甲醇、乙醇、丙酮等）；交联剂（4%PFA、10%中性福尔马林），固定液的选择取决于被研究抗原的性质及所用抗体的 ...

为什么要做血管生成实验？血管生长是肿瘤发生的关键步骤。无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤，一旦生长直径超过1~2mm，都会有血管生成，这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。由于肿瘤组织这种新生血管结构及功能异常，且血管基质不完善，这种 微血管容易发生渗漏，因此肿瘤细胞不需经过复杂的侵袭过程而直接穿透到血管内进入血流并在远隔部位形成转移。越来越多的研究表明，良性肿瘤血管生成稀少，血管生长缓慢；而大多数恶性肿 ...

2020年开始的新冠疫情对人类社会的生存和发展构成了严重的挑战，尽管有相当部分人群施打了疫苗，但病毒不同变异株的出现降低了疫苗的有效性，这就需要其他策略来预防及治疗COVID-19，特别是对于免疫系统受损且发生严重COVID-19的风险增加的患者。已有研究表明，T细胞免疫疗法被证明是治疗免疫系统受损患者的病毒性疾病的有力工具。使用病毒特异性T细胞治疗疾病已经被证明是一种成功的策略，对EB病毒（EBV）、巨细胞 ...

PKH标记外泌体过程中形成了大量PKH纳米颗粒，在大小，表面积和荧光强度方面与标记的外泌体几乎没有区别。同时，PKH26纳米颗粒会被原代星形胶质细胞吞噬到与PKH26标记的外泌体相似的亚细胞区室。总之，PKH类染料用于外泌体标记会导致假阳性信号，并严重影响外泌体的鉴定和细胞摄取实验的真实性。常用方法不能有效去除PKH纳米颗粒，且外泌体损耗大残留的PKH颗粒会造成细胞摄取假阳性结果PKH染料，如PKH67和P ...

​亲脂性荧光染料分子如PKH家族已被广泛用于外泌体标记。有研究使用纳米颗粒跟踪分析（NTA）系统地评估了PKH标记对外泌体尺寸的影响，所有被PKH标记外泌体的尺寸均明显增加，并引入了假阳性结果，故认为PKH不是示踪外泌体的可靠技术。PKH容易引入假阳性PKH可在四个方面引起假阳性：1. 染料聚集造成的假阳性研究表明，PKH的聚集会在体系中引入了新的非外泌体纳米颗粒。如下图（Fig.1）PKH（不含EV）在NTA下观测 ...

Annexin V是常用的检测细胞凋亡的方法，一般通过流式细胞仪来检测。为保证实验结果的准确性，方便后续数据分析，通常需要设置不同对照实验组。①样本不带自发荧光：组别Annexin V核染料样本类型空白对照--不做任何处理的细胞阴性对照++不做任何处理的细胞单阳对照1+-有明显凋亡的细胞单阳对照2-+有明显凋亡的细胞实验组++实验组细胞②样本带自发荧光组别Annexin V核染料样本类型空白对照--不做任何处理无自发荧光的细胞阴 ...

细胞膜染料+外泌体染料双染策略，彻底解决外泌体摄取实验中的假阳性问题。外泌体的细胞摄取实验中有两个难以回避的问题：1）聚集造成的假阳性：常规亲脂性染料在水溶液中自发形成染料聚集体或团块，难以吹散，聚集染料的荧光信号极易与外泌体混淆，引起观测结果的假阳性；2）二次标记造成的假阳性：由于外泌体膜与细胞膜结构的相似性，常规染料标记的外泌体在被细胞摄取后一旦脱落，会二次标记细胞膜带来非外泌体荧光信号。那有什么染色方法可 ...

1 血浆稳定性研究的意义1.1 血浆稳定性研究的重要性在药物发现过程中，先导化合物的代谢稳定性（包括肝代谢稳定性和血浆稳定性等）是影响其成药性的关键因素。在药物研发案例中，很多先导化合物都存在稳定性差的问题，而很多具有良好药理活性的化合物由于不够稳定最终导致研发失败而终止。因此，代谢稳定性研究是寻找候选药物过程中不可或缺的一项重要内容。尽管化合物的肝代谢稳定性被普遍认为是药物发现过程中所面临的最主要的挑战之一，但是 ...

1 空白生物基质采自健康受试者或者健康实验动物的空白全血、血清、血浆、胆汁、乳汁、尿液、粪便、肠道内容物、组织脏器、玻璃体液、房水、脑脊液等多种类型的生物基质，统称为空白生物基质。2 空白生物基质应用在生物基质分析方法的建立和验证中，需要使用空白生物基质，确保分析方法的准确性及可靠性。空白基质主要用于配制校正标样、制备质控样品用于考察分析方法的特异性、选择性、精密度、准确度、基质效应、回收率、稳定性、稀释线性、干扰效应等。其中检测 ...

1 药物与血浆蛋白结合药物和血浆蛋白的结合对药物在体内的分布和转运有重要影响，因此药物蛋白结合率的测定是新药开发过程中的一项重要工作。药物与血浆蛋白结合后很难通过血管壁，故蛋白结合型药物通常没有药理活性。相反，非结合的游离型药物易于透过细胞膜，与药物代谢、排泄以及药效密切相关，具有重要的临床意义。血浆中与药物结合的蛋白主要有白蛋白（Albumin，65KDa）、脂蛋白（Lipoprotein，200~3400 KDa）、a ...

1 Ames试验简介Ames试验，亦称细菌回复突变试验（Bacterial Reverse Mutation Test)，于1975年由美国加利福尼亚大学伯克利分校生化系B.N.Ames教授实验室建立并不断发展完善，至今已成为国际上通用的遗传毒理评价体系的必检项目，同时也是许多遗传毒理学新兴技术发展过程中对照验证结果的试验之一，广泛应用于化合物的致突变性和潜在致癌性的初筛检验。当前，Ames试验在食品、药品、化学品、化妆品、农药 ...

药物被机体吸收后，在体内各种酶以及体液环境作用下发生化学结构的改变的过程，称为药物代谢（Drug metabolism），又称生物转化（Biotransformation）。药物代谢主要在肝中进行，也发生在肠、肾、肺、血液和皮肤等器官，尤其是药物的肠代谢越来越受到人们的关注。口服药物主要经小肠和大肠吸收进入肠毛细血管床，它是药物进入体内的一条重要途径，但研究发现许多药物通过肠道时即被代谢，这种肠道的首过效应往往造成进 ...

磁性细胞分选（MACS）是一种20世纪70年代发展起来的相对高效简便的细胞分选方法，所需设备和操作较为简单，对操作人员的技术要求也不高，只是让细胞处于一个低磁场中，基本可以忽略对细胞的影响，分离得到的细胞具有较高的复苏率及细胞活性，对于下游应用影响较小，在保持细胞活性方面优于流式分选，是细胞分选的首选方法，具有潜在的应用前景。1 磁性细胞分选原理磁性细胞分选是基于免疫学中抗原抗体之间特异性结合的原理进行的。以磁性 ...

【实验操作步骤】1 使用移液管（枪）吸取15ml淋巴细胞分离液注到50ml分离管下室（15ml分离管吸取4ml）；注意：请用移液管直接将淋巴细胞分离液通过隔板小孔注到分离管下室，勿将分离液置于分离管上室，否则分离液难以流至下室，影响后续分离操作。2在50ml分离管中加入2-30ml稀释血液样品（15ml分离管倒入0.5-8ml）；注意：1）请勿将稀释血液样品注入到隔板下室；2）请将稀释血液从隔板上方缓缓加入，所加入的位置勿 ...

正常人外周血中的干/祖细胞的含量占有核细胞数的1%左右，经有效动员后，骨髓中的造血干细胞会释放到外周血中，使外周血中的干/祖细胞比例明显增高。动员外周血是指用有效的动员剂对供者进行动员后采集的外周血。重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）是外周血动员最常用的动员剂，它可选择性的作用于粒系造血祖细胞，促进其增殖、分化，并可增加外周血中性粒细胞的数目和功能。动员外周血单个核细胞是采集经动员后的健康供者的外周血，采 ...

骨髓单个核细胞（Bone Marrow Mononuclear Cells，BMMNCs）是一群混合细胞，其中绝大多数是早幼粒细胞、早幼红细胞、成熟B细胞、T细胞和单核细胞等，还含有少量的干细胞，包括间充质干细胞、造血干细胞和内皮祖细胞等，它们密度相近，因此可通过密度梯度离心法从骨髓液中分离出来。1 原理单个核细胞的体积、形态和比重与其它细胞不同，在沉降过程中不同比重的细胞会处于不同的分布位置。因此，可利用各种血细胞和单个核细胞 ...

脐带血是指胎儿出生时脐带内及胎盘近胎儿一侧血管内的血液。脐带血单个核细胞（Cord Blood Mononuclear Cell，CBMC) 分离自正常人胎盘脐带组织，是脐带血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞等，是机体防御系统的一个重要组成部分。1 原理单个核细胞的体积、形态和比重与其它细胞不同，在沉降过程中不同比重的细胞会处于不同的分布位置。因此，可利用各种血细胞和单个核细胞比重之间的差异将各种血细胞与单个核细胞分离 ...

脾脏（spleen）位于上腹部左后侧，体积较大，长条形，是体内最大的淋巴器官，也是血流通路中的过滤器官。脾脏内定居着大量的淋巴细胞和其它免疫细胞，是机体发生特异性免疫应答的场所。1 原理单个核细胞的体积、形态和比重与其它细胞不同，在沉降过程中不同比重的细胞会处于不同的分布位置。因此，可利用各种血细胞和单个核细胞比重之间的差异将各种血细胞与单个核细胞分离开来。2 方法1）无菌条件下取出脾脏，在培养皿中加入适量的分离液，将脾 ...

外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC），是指外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞（Lymphocyte）、单核细胞（Monocyte）、树突状细胞（DC）和其他少量细胞。1 原理单个核细胞的体积、形态和比重与外周血其它细胞不同，红细胞和多核白细胞的比重超过1.080，单个核细胞的比重为1.070左右，血小板为1.030左右。因此，可利用各种血细胞和单个核细胞比重之间的差异将各 ...