相差显微镜技术

相差显微镜是在普通光学显微镜上增加环状光阑、相差物镜（镜头上标有PC或PH字样）、绿色滤光片和合轴调整望远镜四种附件。

倒置显微镜组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照明系统颠倒，物镜安装在载物台的下方，光源及聚光器安装在载物台的上方。由于工作距离的限制，最大放大率为60x。一般研究用倒置相差显微镜配置有4x、10x、20x及40x相差物镜。

相差显微镜技术的基本原理是将经过透明物体的直射光延迟或提前1／4波长，并和绕射光产生干涉，使相位差变为振幅差。

如果产生的干涉为相长干涉，则振幅的同相量相加而变大，我们便看到较亮的部分；如果所产生的干涉为相消干涉时，则振幅异相量相消而变小，这部分就变得较暗。

这样，变相位差为振幅差的结果，使原来透明的液体表现出明显的明暗差异，对比度增加，能更清晰地观察活细胞的细微结构。

倒置相差显微镜技术用于观察培养瓶或培养板中的活细胞的细微结构。

器材：

培养皿，相差显微镜。

试剂：

倒置相差显微镜技术的基本过程可分为如下几步：

A. 打开倒置相差显微镜电源开关，将标本置于载物台上。

B. 转动聚光器下面的环状光阑转盘，使普通光阑进入光路，并将光圈开到最大。旋转物镜转换器，使低倍相差物镜进入光路，按普通显微镜常规操作方法进行对光和调焦，看见标本。

C. 转动转换器，使相差物镜（20x）对准标本，同时转动环状光阑转盘选用20x标示孔的光阑，以使环状光阑的直径和孔宽与所使用的相差物镜相适应，用细调节器调节焦距，使物像清楚。

D. 合轴调节 将合轴望远镜换入目镜筒内，一边向望远镜内观察，一边用右手转动望远镜内筒使其下降，当对准焦点就能看到环状光阑的亮环和相板的黑环，此时可将望远镜固定住。

再升降聚光器并调节其下的螺旋使亮环的大小与黑环一致，然后前后左右调节环状光阑聚光器上的调节钮，使两环完全重合。

如图1-5所示。如亮环比黑环小而位于内侧时，应降低聚光器使亮环放大；反之，则应升高聚光器，使亮环缩小。如若升到最高限度仍不能完全重合，则可能是载玻片过厚之故，应更换。