血球计数板怎么使用 求详细讲解版

1. 视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。
2. 取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。
3. 静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。计数时若计数区是由16个中方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个中方格（即100小格）的菌数。如果是25个中方格组成的计数区，除数上述四个中方格外，还需数中央1个中方格的菌数（即80个小格）。为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。
4. 对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），按公式计算出每mL（g）菌悬液所含细胞数量。测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。

以下是详细的使用方法：

1. 准备工作：首先需要准备一些实验室用品，包括血球计数板、显微镜、标本夹、荧光染料等。

2. 取血样：使用一根无菌注射器或针头取一定量的血液样本，将其放入一只试管中。

3. 加荧光染料：向试管中加入一定量的荧光染料，并充分混合。

4. 取样：使用一根无菌的玻璃移液管将一定量的血液样本取到血球计数板上。

5. 用显微镜观察：将计数板放在显微镜上，使用适当的放大倍数观察血液中的细胞。

6. 计算细胞数量：观察计数板上的不同区域，计算每个区域中不同类型的细胞数量，最后求出平均值。

7. 记录数据：将每个区域的细胞数量记录在实验记录表上，并计算出总平均值。

8. 清洗：使用适当的清洗液清洗血球计数板和显微镜，避免交叉污染。

2.血球计数板的使用方法

(1)用血球计数板计数培养液中的细胞个数。

(2)样品稀释的目的是便于细胞的计数，以每小方格内含有4~5个细胞为宜，一般稀释10倍即可。

(3)将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室盖上专用的盖玻片。

(4)将稀释后的培养液，用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余的用吸水纸吸取，稍待片刻使之全部沉到计数室内。

(5)计数时，如果使用16×25型的计数室，要按对角线位，取左上，左下，右上，右下4个中方格（即100个小方格）的细胞个数3如果为25×16型的计数室，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中方格（即80个小方格）的细胞个数。

(6)当遇到位于方格线上的细胞，采用样方法中“计上不计下，计左不计右”的计数原则，

(7)对每个样品计数3次，取其平均值，再按有关公式计算每毫升培养液中所含的个数。

血球计数板是一种用于计数血液细胞数量的实验室仪器。使用血球计数板需要一些基本的实验室技能和经验，下面是一个简单的步骤：

准备好血液样本。通常需要使用抽血针从患者的静脉或指尖抽取一定量的血液样本。

将血液样本放入一定体积的生理盐水中，并充分混合。这个过程称为“稀释”。

取出一个血球计数板，并使用吸管将稀释后的血液样本吸入到血球计数板的计数室中。计数室是一个由小方格组成的方形区域，通常是由精密的玻璃制成。

使用显微镜在计数室中观察血液细胞。计数室中的小方格被细线分成若干个小区域，每个小区域内都有一定数量的小方格。通常需要在显微镜下观察10个小区域，以得到足够准确的计数结果。

计算每个小区域内血液细胞的数量。不同的小区域可能具有不同的形状和大小，但每个小区域内的小方格数量是相同的。通常需要计算每个小区域内红细胞、白细胞和血小板的数量，并将它们加起来得到总数。

计算血液细胞数量的浓度。将总计数结果除以每个小区域内的小方格数量，再除以稀释倍数，就可以得到每升血液中血细胞的数量。

需要注意的是，在使用血球计数板进行血液细胞计数时，需要遵守严格的实验室操作规范，以确保结果的准确性和可靠性。建议在有经验的实验室工作人员的指导下进行操作。

血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区（图21-1），计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。计数区边长为1mm，则计数区的面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。

使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。

已知：1mm3体积=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3

所以：1mm3体积应含有小方格数为1000mm3/1/4000mm3=4×106个小方格，即系数K=4×106 。

因此：每ml菌悬液中含有细胞数= 每个小格中细胞平均数（N）×系数（K）×菌液稀释倍数（d）