简介
3H-TdR 掺入法又称放射性核素标记法,具有客观、准确、重复性好的特点,但需一定的设备,并且放射性核素对环境有污染,需要特殊处理。
材料与仪器
器材:细胞收集器、β 液闪计数仪。
试剂:
① H-TdR 工作液。
② 闪烁液
步骤
3H-TdR 掺入法检测细胞增殖的基本过程可分为如下几步:
A. 按 1:20 的比例将浓度为 1 mCi/ml 的 3 H-TdR 用无血清培养液稀释,终浓度为 50 μCi/ml。
B. 在培养细胞中每孔加入 20μl 3H-TdR(1 μCi/ml),继续培养 4—24 小时。
C. 用多头细胞收集器将每孔培养物分别收集到 UniFilter 96 孔微孔板上,抽气过滤洗涤。
D. 微孔板放置 50℃ 烘干 1 小时,封闭板底,每孔加 25—50 μl MicroScint-O cocktail。
E. 在β液闪计数仪上测定每个样品 cpm 值。
F. 结果测定:将丝裂原刺激组和对照组各自的 cpm 平均值,代入下列公式计算出刺激指数(SI)。
来源:丁香实验