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3H-TdR 掺入法检测细胞增殖

相关实验:细胞增殖检测实验

最新修订时间:

简介

3H-TdR 掺入法又称放射性核素标记法,具有客观、准确、重复性好的特点,但需一定的设备,并且放射性核素对环境有污染,需要特殊处理。

材料与仪器

器材:细胞收集器、β 液闪计数仪。

试剂:

① H-TdR 工作液。

② 闪烁液


步骤

3H-TdR 掺入法检测细胞增殖的基本过程可分为如下几步:

A. 按 1:20 的比例将浓度为 1 mCi/ml 的 3 H-TdR 用无血清培养液稀释,终浓度为 50 μCi/ml。

B. 在培养细胞中每孔加入 20μl 3H-TdR(1 μCi/ml),继续培养 4—24 小时。

C. 用多头细胞收集器将每孔培养物分别收集到 UniFilter 96 孔微孔板上,抽气过滤洗涤。

D. 微孔板放置 50℃ 烘干 1 小时,封闭板底,每孔加 25—50 μl MicroScint-O cocktail。

E. 在β液闪计数仪上测定每个样品 cpm 值。

F. 结果测定:将丝裂原刺激组和对照组各自的 cpm 平均值,代入下列公式计算出刺激指数(SI)。



来源:丁香实验

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