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    基本方案4 Distamydn-DAPI 显带（偏端霉素-二脒基苯基吲哚显带)

    相关实验：染色体显带技术

    最新修订时间：

    材料与仪器

    空气晾干的分裂中期染色体玻片
    McIlvaine 缓冲液 Distamycin A 染色液 DAPI染色液 镜油 弱荧光
    湿盒（如装有湿纸巾的Petri盘） 盖玻片 配有合适滤光片和物镜的荧光显微镜

    步骤

    1•于室温，将空气瞭干的分裂中期染色体玻片浸入pH 7 . 0 的 McIlvaine缓冲液中 5min0 滴干。 2.将玻片放入湿盒。力卩 3〜6 滴 Distamycin A 染 色 液 （100〜200^1)，加盖玻片使染液 弥漫。室温放置lOmin，如有需要，减少Distamycin A 染色液的孵育时间，以突出
    DAPI显带。 3 . 在 p H 7. O 的 McIlvaine缓冲液中简单漂洗玻片（ 约 IOs)。于室温，用 D A P i 染色液 染色lOmin。然后再次用p H 人〇的 McIlvaine缓冲液漂洗。 4 . 用 pH 7. 5 的 McIlvaine缓冲液封片，加盖〇 号或丨号盖玻片。 5 . 在荧光显微镜下观察，用弱荧光的镜油和Hoechst滤 光 片 （ D A P I 吸收355n m 光， 在约45〇 n m 发光） 。按照支持方案3 (第 3 步）进行拍照。注意不要用较快胶片拍 照，以免导致带型清晰度下降。 备选方案 5 H oechst 33258-D istan m ycin 染色 附加材料（ 标V 的条目参见附录1) V P B S VHoechst 33258 染液 A 封片缓冲液： I : I (V A a) 甘油/McIlvaine缓冲液， p H 7.5 染色缸 喷 雾 器 （ 可选） 1. 在室温将空气晾干的玻片浸入P B S 溶液中5min。 2 . 在室温将玻片浸入含有Hoechst 33258染液A 的染色缸中12min。 3•在PBS溶液中洗涤玻片4m in，然后用流水冲洗玻片lm m 。如需要，可将玻片保存 于带盖子的盒子中。 4. 在玻片上滴加3 滴 Distamycin A 染色液，加盖玻片，静置5min。用 pH 7. 5 的McIlvaine缓冲液中漂洗玻片，可用喷雾器进行。 5. 用封片缓冲液封片，静置2min。如前所述进行观察和拍照（ 支持方案3 , 第 2 和 3 步） 。注意不要用较快胶片拍照，以免导致带型清晰度下降。 支持方案6 脱色 材料 已染色的玻片，未封片的或未永久封片的。 95% (V /V ) 乙醇 二甲苯或 Hemo-De (Fisher) 1 : I (V A O 二甲苯/乙 醇 （ 如果使用二甲苯） 固定剂： 3 : I (V /V ) 甲醇/冰乙酸 甲醇，试剂级别 la. 如果玻片为含水缓冲液封片：小心抬起并取下盖玻片（ 如果缓冲液已干，可用流动 水冲洗） 。如果已经浸有镜油，可直接进入第2a 或 2b 步，如果没有可直接进入第 3 步。 lb. 如果玻片为甘油封片：在水中浸泡2h ，取下盖玻片，然后浸入乙醇中2min，晾干。 如果已经浸有镜油，可直接进人第2a 或 2b 步，如果没有可直接进入第3 步。 lc. 如果未封片：如果已经浸有镜油，可直接进入第2&和 洗 步 ，如果没有可直接进人
    第 3 步。 2a. 如果使用二甲苯：将玻片浸泡在二甲苯中以去除油渍，然后分别用工： 1 二甲苯/乙 醇和9 5 % 乙醇各浸泡lmin。 2 b . 如果使用H e m o - D e : 将玻片浸入Hemo-De lOmin。 Hemo-De的 危 险 性 要 小 于 二 甲 苯 。 3. 将玻片浸人固定剂中IOmin, 以去除染色液。 4 . 将玻片在甲醇中浸沾lmin，空气晾干。

    来源：丁香实验

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