丁香实验_LOGO
登录
搜索
    搜索
    提问
    我要登录
    ｜免费注册
    点赞
    收藏
    wx-share
    分享

    基本方案2 应用 GTG 技术进行吉姆萨显带（G显带）

    相关实验：染色体显带技术

    最新修订时间：

    材料与仪器

    制备好的中期染色体玻片
    HBSS 乙醇 吉姆萨染色液 Xylene 或 Hemo-De
    玻片染色缸 光学显微镜 细粒度胶片

    步骤

    1 . 准备几个染色缸，依次装有如下溶液，放置于室温： H B S S ； 胰蛋白酶溶液； H B S S ； 7 0 % 乙醇； 9 0 % 乙醇； 2 % 吉姆萨染色液； 水 。
    2 . 将制备好的中期染色体玻片放入H B S S 约 10s。 3•将老化的玻片移入胰蛋白酶溶液中，骨髓制片孵育30s ，淋巴细胞或羊水细胞孵育 60s ，由其他长期组织培养而来的细胞孵育90s。如需要，用 3 〜5 张同样的玻片来确 定最佳的胰蛋白酶消化时间。避免胰酶消化不足（ 导致没有条带）或胰酶消化过度 (导致染色体肿胀、染色体周围区域着色） 。 4.依次在盛有 H B S S 、 7 0 % 乙醇和9 0 % 乙醇的染色缸中漂洗玻片，在每一个染色缸中 浸 沾 3 或 4 次。空气晾干。如需要，可存放数小时。 5•将玻片放入吉姆萨染色液中4min， 或根据经验确定最佳染色效果的染色时间。 6. 将玻片放入水中约30s， 空气晾干，可存放数月或数年。 7 . 滴加， 油 ，直接在光镜下观察，应用绿色干扰滤光片可获得黑白照片，用细粒 度 胶 片 ，采用A S A 50〜100的背景以及较短的曝光时间。用二甲苯或Hemo-De清洗镜油 后 ，保存玻片。 备选方案1 用 瑞 特 （ W r ig h t) 染色剂进行G 显带 ^ 此种 G 显带方法得到的染色体轮廓鲜明，可改善普通G 显带方法的不足。同样可 用 于 G 显带脱色后的（ 支持方案6) Q 显 带 （ 基本方案1)。 附加材料 （ 见基本方案2 ; 标V 的条参目见附录1) V Bacto胰蛋白酶溶液 V Sorensen憐酸盐缓冲液， p H 6. 8 V W r i g h t 染 色 液 （ 新鲜配制） 1. 将老化的玻片放入盛有Bacto胰蛋白酶溶液的染色缸中20〜30s，然后在p H 6. 8 的 Sorensen憐酸盐缓冲液中晃动、漂洗。 2 . 将玻片水平放入新鲜配制的W r i g h t 染色液中40〜60s (溶液由于水与乙醇之间的反 应放热，而感到微温） 。 3 . 在水中轻轻摇动、清洗玻片，空气晾干，可保存数年。 4•按前述方法观察并拍照（ 基本方案2 , 第 7 步） 。 支持方案1 加热法老化玻片 存放、加热及干燥均可使染色体改变（ 可能是由于蛋白质变性） ，从而影响条带。 时间不够的玻片可出现条带模糊、失真。时间过久可导致无条带。不同技术对时间的要 求变化范围很大，最佳时间的确定可因不同细胞类型或组织来源而变化。 将空气晾干的中期染色体玻片在55°C 孵育2d ， 或 90〜95T：孵育20min。 如有需要， 可缩短孵育时间，提高孵育温度。如果孵育时间超过2d (如遇到周末） ，应降低孵育温 度。不同实验室可根据经验建立最佳时间和温度条件。 支持方案2 用过氧化氢老化玻片 如需对玻片立即显带，用过氧化氢处理玻片，可得到同样的老化效果。 材料 空 气 晾 干 的 中 期 染 色 体 玻 片 （ 新 制 备 的 ，单 元 4.1)
    1 5 % ( V A O H 2O 2 (用之前以 3 0 % 的 H 2O 2I :1 稀释） 染色缸 50°C加热盘或玻片加热器 1. 用新鲜配制的15%氏02直接冲洗玻片，使其接触过氧化氢， 71^11。 2 . 将玻片放入盛满水的染色缸中，用自来水冲洗2min。 3 . 将玻片放在50°C 加热盘或玻片加热器上I h 或过夜。降至室温后可进行染色。

    来源：丁香实验

    提问
    扫一扫
    丁香实验小程序二维码
    实验小助手
    丁香实验公众号二维码
    扫码领资料
    反馈
    TOP
    打开小程序