染色体G显带技术

一、原理
G显带机制有许多学说，但尚无定论。目前比较倾向于多因素决定论，即带型的形成主要取决于DNA、核酸结合蛋白及染料三者的相互作用，主要是指DNA的碱基组成以其与结合蛋白形成的特定结构对染料分子的作用。Summer（1974）的实验表明，DNA分子的螺旋及折叠非组蛋白蛋白质的分布在染色体上呈区域性差异，这些差异导致二硫键与硫氢键分布不同，深染区由许多二硫键交联，因为它易与染料结合；而浅染区则缺乏二硫键，多硫氢键，不易与染料结合而呈浅色。

此外，由于染色体内DNA的碱基分布不同而造成DNA螺旋，折叠的程度也不同，继而影响到结合蛋白的分布与构型，与染料结合后呈现深浅不同的带绞。目前G显带常用的方法是GTG法（G-band by Trysin using Giemsa）

二、操作过程

1. 已制备好的染色体玻片在65℃烘箱烤片2~3小时，存放于37℃温箱备用。

2. 用生理盐水配制0.14%胰蛋白酶液（70 mg 胰酶溶于50 ml 生理盐水），保存于-18℃中备用。使用时取15 ml 母液加35 ml pH6.7磷酸缓冲液稀释到0.042%为工作液。用前预温至26℃。

3. 一张标本片浸入胰酶液处理15~25秒。

4. 取出玻片在蒸馏水中漂洗以下洗去胰酶液。

5. pH6.7磷酸缓冲液稀释Giemsa原液（1：10稀释）作染液，染色8分钟。

三、注意事项

1. 染色体标本G显带要求3天左右片龄。且染色体长度适中（1号染色体长度约10±2 μm），分散良好、重叠少或无。如片龄延长，则胰酶处理时间适当延长。

2. 胰酶工作液应现配现用。随着处理标本片的增加，酶活性会随之下降，处理时间需延长。

3. 为了获得形态合适的染色体标本，秋水仙素处理浓度要低些或处理时间短些。

4. 显带时，可先取一片作试片，试片上分段以不同时间酶解，以确定较为合适的酶解时间。

5. 酶解作用的时间与酶液温度及胰酶浓度成反比，温度高或浓度大则处理时间短。

6. Q显带标本褪色后可作G显带，方法同前。

7. G显带不足时，经固定液褪色后可重新显带，但效果差一些。

8. 胰酶溶液也可用无Ca2+，Mg2+的Hank液、ICN液或0.02%EDTA液作溶剂。胰酶在EDTA中活性较强，标本酶解时间应适当减少。