染色体C显带技术
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一、原理
染色体标本经强碱(NaOH或Ba(OH)2)热处理后,在着丝粒周围区域和异染色质区经Giemsa染成深色,而染色体两臂的常染色质部分仅有浅淡轮廓。这是一种染色体上不显示带纹的特殊显带法,主要显示着丝粒区和异染色质区的变化。这种技术称为着丝粒区异染色质法,故简称C带。常用的为CBG法(C-band by Barium hydroxide using Giemsa),即用Ba(OH)2处理后用Giemsa染色。
二、操作过程:
1. 制片、烤片同G显带技术(65℃,2小时)。
2. 染色体标本在室温下用0.1 N HCl水解15分钟后蒸馏水冲洗。
3. 2% Ba(OH)2,65℃处理10分钟后蒸馏水冲洗。
4. 2×SSC,65℃处理1小时。
5. 冲洗冷却后用1:10 Giemsa稀释液染色7分钟。
6. 冲洗后晾干,镜检。
7. 核型分析:标本经低倍镜选择后换油镜分析染色体上着丝粒和异染色质区的变化。选择典型分裂相经显微照相后放大扩印,按C带分析标准剪贴。
三、注意事项
1. 染色体制片后可立即作C显带。片龄不宜太长,过长会影响C带质量。
2. 染色体标本质量较好,分裂相周围无细胞质等背景时免去盐酸水解。