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C显带技术法

相关实验:染色体显带实验

最新修订时间:

简介

C显带技术是使结构异染色质或高度重复的 DNA 着色,这种显带方法对染色体着丝粒区和 Y 染色体长臂异染色质区的观察十分有利。

原理

C显带技术法的基本原理是是使结构异染色质或高度重复的 DNA 着色。

材料与仪器

器材:


① 染色缸


② 恒温水浴箱


③ 显微镜


④ 烘箱


⑤电吹风


⑥人中期染色体玻片标本。


试剂:


① 0.25% 胰蛋白酶溶液


② 0.85% 生理盐水


③ 吉姆萨工作液


④ 1 mol/L NaH2PO4 缓冲液(pH4.0~4.5)


⑤ 0.2 mol/L HCl


⑥ 1% 的 Ba(OH)2


⑦ 2 x SSC 溶液


⑧ 0.4% 酚红

步骤

C显带技术法的基本过程可分为如下几步:


A 常规制片后,将染色体玻片标本浸入 0.2 mol/L HCI 溶液中,室温放置 1 h。


B 用蒸馏水冲洗染色体玻片标本。


C 将染色体玻片标本浸入 50 ℃ 预热的 1% Ba(OH)2 溶液中,处理 15~20 s。


D 用蒸馏水冲洗染色体玻片标本。


E 将染色体玻片标本浸入 2 x SSC 溶液中,60 ℃ 处理 90 min。


F 用蒸馏水冲洗染色体玻片标本后,用吉姆萨工作液染色 20~30 min。


G 流水轻轻冲洗玻片背面,将多余的吉姆萨染液冲掉。


H 空气干燥。


I 先用低倍镜浏览整张染色体玻片标本,再用油镜观察并识别染色体的着丝粒(或 Y 染色体长臂的异染色质区)。

来源:丁香实验

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