染色体G显带法实验

一、实验目的
初步了解什么是染色体带型，掌握染色体G显带方法。
二、实验原理
染色体的分带是70 年代发展起来的技术，其中使用最广泛的是G带。显示G 带的方法很多，最常用的是将已制成染色体标本的玻片进行预处理，然后进行Giemsa染色。预处理的方法很多，如用热碱、各种蛋白酶、尿素、去垢剂或其它溶液等，其中最常用的是用胰蛋白酶进行预处理，方法简便，周期短。
G带区在DNA较丰富的A-T 对，在间期核呈固缩状态，而且是DNA晚复制区之一。有相当一部分中度重复序列DNA可能在G带区，Giemsa染料在G带区是与DNA结合，而且与结合DNA的染色质非组蛋白有关。G带区位于染色体的两臂上，和Q带区相对应，而与Ｒ带区相反。
获得优良的G带需要反复的实践，干净的制片，丰富而又清楚的分裂相，固定的实验条件和足够的经验是十分重要的。
三、实验材料
小白鼠骨髓细胞染色体制片不经染色留下的标本片。
四、实验器具和药品 试剂
显微镜、冰箱、恒温箱、 水浴 锅、立式染缸、镊子、切片架、切片盒、烧杯、量筒、吸管。
胰蛋白酶(Diffco,1:250)、乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、氯化钠、PH6.8磷酸缓冲液 、Giemsa 原液、2×SSC溶液。
五、 实验方法和步骤
G带的方法很多，现介绍3种方法，但无论那种方法，片龄以不超过5天为宜。
(一)胰蛋白酶－EDTA法
1．0.1％胰蛋白酶和0.02％EDTA按1：1混合于立式染缸中，并调至PH6.8，暂置冰箱中备用。
2． 将在37℃温箱中预处理3个小时的标本片分别浸入胰蛋白酶和EDTA混合液中，轻轻摇动30～75秒钟。
3． 将处理过的标本在磷酸缓冲液中漂洗数秒。
4． 立即用1:10 Giemsa染液染色20～40 分钟。
5． 流水冲洗，空气干燥后镜检。
(二)胰蛋白酶消化法
1．37℃烤片2～3小时。
2．将制片放入37℃预热或15℃预冷的0.25％的胰蛋白酶溶液中5～30秒。
3．0.85％NaCl溶液冲洗两次，凉干后染色。
(三)ＡＳＧ(Acetic-saline-Giemsa)法
1．用甲醇、冰醋酸固定液固定，空气干燥法制片的标本。
2．浸入2×SSC溶液中，60℃温育1小时。
3． 蒸馏 水冲洗。
4．1/20 Giemsa 染液染色1 小时。
5．水洗后凉干镜检。