定量PCR可以用于：（1）以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR起始模板量的定量；（2）用外标法（荧光杂交探针保证特异性）通过监测PCR过程（监测扩增效率）达到精确定量起始模板数的目的，同时以内对照有效排除假阴性结果（扩增效率为零）。

原位 PCR（in situ PCR）就是在组织细胞里进行PCR反应，它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点，在分子和细胞水平上检测特定的基因组序列、转基因及外源基因，对研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转归有重大的实用价值，在分子生物学、细胞学、分子病理学及临床诊断领域里具有巨大的应用前景。根据操作方法的不同，原位PCR可分为间接法和直接法。直接法操作步骤较少，但具

反转录-聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量的RNA样品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。

转录后基因沉默机制（post-transcriptional gene silencing，PTGS）被称为RNA干扰（RNAi），与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链 RNA（dsRNA）导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。目前为止较为常用的制备 siRNA的方法有化学合成、体外转录、长片段dsR-NA经RNA酶I类降解（如Dicer，E.coli的RNA

印迹杂交是指将待测核酸片段结合到一定的固相支持物上，然后与存在于液相中的标记探针进行杂交的过程。Southern印迹技术（Southern blot）是将DNA转移到固相支持物上，然后与存在于液相中的标记探针进行杂交的过程。Southern印迹技术可检测特定大小DNA分子的含量，常用于克隆基因的酶切图谱分析、基因组基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性长度多态性分析（RELP）等。

RNA的提取通过变性剂破碎细胞或者组织，然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA，再经过沉淀，洗涤，晾干，最后溶解。但是由于RNA酶无处不在，随时可能将RNA降解，所以实验中有很多地方需要注意，稍有疏忽就会前功尽弃。

酵母双杂交系统(yeast two-hybrid)以酵母遗传分析为基础，研究反式作用因子之间相互作用对真核基因转录调控影响的实验系统。其最有价值的应用是用BD-X筛选由AD-Y构成的cDNA文库，以获得新的蛋白质之间的相互作用，并分析研究新的基因。本技术不仅可用于鉴定新的蛋白质相互作用，证实可疑的相互作用，确定相互作用的结构域，而且可直接获得编码相互作用的蛋白的基因。

人类嗜 T 细胞病毒（HTLV）是第一个被发现的与人类癌症相关的反转录病毒，可分为 HTLV-1 型和 HTLV-2 型。HTLV-1 是 1978 年从人类 T 淋巴细胞白血病患者的淋巴结及外周血淋巴细胞中分离到，HTLV-1 型主要感染 CD4+ T 淋巴细胞并在其中生长，使受感染的 T 淋巴细胞转化，最后发展成为 T 淋巴细胞白血病，是成人 T 淋巴细胞白血病（adult T cellleu

人类免疫缺陷病毒（HIV）是人类获得性免疫缺陷综合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）即艾滋病的病原体。AIDS 是美国 Gottlieb 于 1981 年在同性恋患者中首次发现。1983 年法国巴斯德研究所 Luc Montaginer 等首先从 1 例慢性淋巴结病的男性同性恋患者血中分离并鉴定出 HIV-1。现在 AIDS 已在全世界范围内流行，

肾功能不全指某些病因造成肾实质严重损伤。目前，用于肾功能不全实验的教学方法主要有 2 种：家兔急性肾功能衰竭法和蟾蜍急性肾功能衰竭法。

限制性片段长度多态性 PCR，是理论依据是首先利用 PCR 扩增目的基因，然后用限制性内切酶酶解样品 DNA，产生大量的限制性酶切片断。将限制性酶切产物进行含有漠化乙锭的琼脂糖凝胶电泳分离，在紫外灯下即可分辨各种限制性片段的大小及其位置。或者将限制性酶切产物与探针杂交进行放射自显影，从而区分各种片段。由于目标 DNA 之间存在有同源性和变异性，当用同一种限制性内切酶酶解不同品种或同一品种的不同个体

PCR-变性梯度凝胶电泳，是把 30~50 个 GC 碱基组成的核苷酸链加在其中一条引物的 5' 端，通过 PCR 扩增目的基因，使扩增产物的一端含有 GC 碱基即 GC-clamp。由于 GC-clamp 为扩增片段中 Tm 值最高的区域，而其它部分因所含碱基的种类不同，其 Tm 值也不同，而且明显低于最高 Tm 值。将带有 GC-clamp 的 DNA 片段放入变性剂（尿素和甲酰胺）呈线性梯度

同源一步荧光等位基因特异性 PCR，是利用含有大量吸收单元的水溶性共轭聚电解质（water-soluble conjugated polyelectrolytes，CP），激发能量沿着 CP 的骨架转移到发色团报告物，导致荧光信 号的扩增。将等位基因特异性 PCR 与利用 CP 检测联合起来。目前，用于同源一步荧光等位基因特异性 PCR 的方法主要有 1 种：同源一步荧光等位基因特异性 PCR。

低温变性共扩增 PCR，是不管突变存在于什么位置，均能从野生型和含突变的序列的基因混合物中选择性扩增出为数不多的等位基因的方法。目前，用于低温变性共扩增 PCR 的方法主要有 1 种：低温变性共扩增 PCR。

L-DNA 标记的等位基因特异性 PCR，是将等位基因特异性 PCR 与 L-DNA 标记的 PCR 结合起来。L-DNA 标记的 PCR 扩增的 DNA 是带有序列确定的 L-DNA 标签。L-DNA 是自然存在的 D-DNA 的对映体，由 L-2' 脱氧核昔酸组成。单链 L-DNA 能够与 L-DNA 互补，但不与 D-DNA 互补，由于大分子的手性，自然界的酶如核酸酶、聚合酶也不能对 L-D

简单等位基因辨别 PCR，在基于扩增阻碍突变系统（amplifi-cation refractory mutation system，ARMS）原理的基础上设计引物，如果引物和对应的非靶 向模板之间配对，那么在引物 3'末端倒数第二个碱基处引入一个额外的错配碱基，这种方法被命 名为简单等位基因辨别 PCR（simple allel-discriminating PCR，SAP），与 CAPS 相比

等位基因特异性 PCR，也称错配 PCR（mismatch PCR）， 扩增耐突变系统（amplification refractory mutation system，ARMS）， 错配扩增突变分析（mismatch amplification mutation assay，MAMA），是相较单链构象多态性分析（single stnmd conformation polymorphism，SSC

荧光蛋白的实用性在于它可以实时的监测蛋白表达和定位。而很多情况下对这些蛋白的应用需要利用荧光激活的细胞分选仪（FACS）对细胞进行准确和定量地分析和分选。我们特别介绍利用 FACS 来分选有 EGFP（增强绿色荧光蛋白）表达和基因诱捕的内源性启动子的细胞。利用荧光报告基因进行基因诱捕为我们提供了一种敏感的方法来校准诱捕的基因表达水平和回收那些表达追踪基因的细胞。本方法将阐明以下几点：① 荧光载体转

荧光报告蛋白的多参数流式细胞术是使我们能够非介入式地区分不同的细胞群，或者在单个细胞水平来分析基因功能和蛋白-蛋白之间的相互作用的实验。目前，主要的方法有 ① 稳定表达 ECFP、EGFP、EYFP 和（或）DsRed 蛋白的细胞系的建立；② 四色荧光蛋白的同时检测；③ 其他同时检测 2、3 或 4 种荧光蛋白的方法共 3 种方法。

外周造血池动员的 CD34NEG 造血前体细胞表型和功能分析是在无血清培养条件下，研究原始CD34NEG CD38NEG LINNEG 细胞和CD34+ CD38NEG LINNEG 细胞增殖状态过程中 CD34 抗原表达调变的实验。