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蛋白质转染诱导 ips 细胞
Oct4, Klf4, Sox2, and c-Myc 转录因子的异味表达可以使小鼠体细胞重新编程诱导功能干细胞。(1)有利于功能干细胞的再分化,充分利用资源。(2)降低外源性基因整合风险。
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MARK 信号通路
丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是广泛存在于各种细胞中的一条信号转导途径,由一组级联活化的丝/苏氨酸蛋白激酶组成,对于细胞周期的运行和基因表达具有重要调控作用。MAPK包括多个成员,活化后向核内迁移,磷酸化包括转录因子在内的核蛋白和膜受体,实现对基因转录和其他事件的调节。
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靶向 EGFR 基因 siRNA 表达载体的构建
利用Lipofeetamine2000将构建的psj-EGFR载体转入A549细胞中,应用实时定量荧光PCR、免疫荧光和流式细胞仪检测EGFR基因mRNA和蛋白水平的表达,并采用四甲基偶氮唑蓝显色法(MTT)、集落形成实验观察细胞生长变化。
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PCR-ELISA 端粒酶检测法
端粒是真核生物染色体末端的特异DNA-蛋白结构,端粒DNA是一系列重复的富含G的DNA序列,这一序列在生物进化中有高度的保守性(人重复序列为TTAGGG)。已确认端粒在保护基因组DNA不被降解、防止染色体有害的结合(如染色体末端融合、重排、染色体移位和染色体缺失)中起重要作用。
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多糖多酚植物 RNA 快速提取
一些植物之所以比较难提取出高质量的RNA与这些组织中富含的一些成分有关,常见的有酚类化合物,多糖以及某些尚未明确的次级代谢物,另外就是富含较高活性的RNase的组织。
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PPA 制备与使用的基本技术
将初步纯化的SPA与HRP用过碘酸钠氧化法(交联反应时间在22℃下5h)交联可得到PPA。
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转录 cDNA 探针
从相应的基因转录获得了mRNA,再通过逆转录得到的探针,称为cDNa 探针(cDNa probe)。与基因组探针不同的是,cDNA探针不含有内含子序列。
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ABI 310型 DNA 测序仪的测序原理和操作规程
DNA序列测定分手工测序和自动测序,手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪,其中310型是临床检测实验室中使用最多的一种型号。
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DNA 的 Feulgen 染色法
DNA经弱酸(1mol/L HCl)水解,其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开,使脱氧核糖的一端形成游离的醛基,这些醛基在原位与Schiff试剂(无色品红亚硫酸溶液)反应,形成紫红色的化合物,使细胞内含有DNA的部位呈紫红色阳性反应。紫红色的产生,是由于反应产物的分子内含有醌基,醌基是一个发色团,所以具有颜色。对照组预先用热三氯醋酸或DNA酶处理,抽提去细胞中的DNA而得到阴性反应,从而证明了Feu
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液氮研磨法
液氮研磨应用于有关脱氧核糖核酸(DNA)分离
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表观分子量的判定实验
来源:《蛋白质与蛋白质组学实验指南》
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含有多聚组氨酸标签重组蛋白纯化实验
在本方案中,用重组病毒储液感染 Sf 9 细胞,在感染后 2~3 天分析。分析方案依赖于表达蛋白的天然特性。本方案仅提供一些建议步骤,但不可能包括全部。根据表达蛋白的不同特性和已有的检测试剂,筛选步骤可做相应的改变。内容来源于《精编分子生物学实验指南(第五版)》
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IMViC 与硫化氢实验
IMVIC 是吲哚试验(indol test)、甲基红试验(methyl red test)、伏-普试验(Voges-Prokauer test)和柠檬酸盐试验(citrate test)四个试验的缩写。i 是在英文中为了发音方便而加上去的。这四个试验主要用来鉴别大肠杆菌与产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes),多用于水的细菌学检查,大肠杆菌虽非致病菌,但在饮水中若大肠杆菌超过
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人胚胎癌(EC)干细胞系的来源和培养实验
畸胎癌 (teratocarcinomas) 是一种结构多样性肿瘤,通常由形成畸胎瘤(teratoma) 的一系列分化的细胞类型和一群称作胚胎癌细胞(EC) 的干细胞构成。在肿瘤内胚胎癌细胞进行分化,这一过程漫画式地再现了胚胎发生过程。 作者: 斯泰赛等,主译:章静波,本实验来自「人干细胞培养」
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人生殖细胞谱系的培养实验
本章关注的是胚胎生殖细胞(E G C ) , 目的是提供一系列实验方案,利用这些实验方案有望了解E G C 与其他人干细胞之间的关系。 作者: 斯泰赛等,主译:章静波,本实验来自「人干细胞培养」
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氧敏感蛋白的分离技术:以[4Fe-4S]-FNR为例
描述在实验室分离氧敏感铁-硫蛋白FNR所使用的方法。 作者: 伯吉斯等,主译:陈薇,本实验来自「蛋白质纯化指南」
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表达与纯化的平行方法实验
蛋白质的性质是多种多样的,这使得使用平行方法表达和纯化蛋白质具有挑战性。平行方法尤其可以应用在需要一种目标蛋白质的多种衍生物,以及需要多个同系物时。典 型的方案包括对目标的评价、目标的克隆和诱变、表达筛选、大规模的表达和纯化,以及对所产生蛋白质的分析和生物物理测试。本章介绍了一些用于平行蛋白质表达和纯化的策略及方法。 作者: 伯吉斯等,主译:陈薇,本实验来自「蛋白质纯化指南」
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蛋白质亚基的存在及其大小和分子质量的测定实验
蛋 白 质 的 大 小 或 表 观 分 子 质 量 也 许 是 最 常 用 来 区 分 分 子 性 质 的 。作 为 许 多 分 离 方 法的 基 础 ,分 子 质 量 或 者 仅 仅 分 子 大 小 就 可 以 直 接 提 供 分 子 复 杂 程 度 的 信 息 ,如 分 子 是 否 易于 大 量 生 产 ,或 者 某 个 分 析 方 法 是 否 可 能 有 效 。而 了 解 目 的 多 肽 是
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整合膜蛋白在单室脂质体中的无细胞翻译实验
膜蛋白提供了相应的分子机制,使得有用的分子能够可控地进入细胞,并且允许细胞内的产物输出到胞外。细胞膜上的酶合成了组成细胞膜的分子 (如饱和与不饱和脂肪酸、憐脂、甘油酯、鞘脂、甾醇、聚异戊二烯)。细胞膜上的酶复合物负责电子传递, 产生电化学梯度 』 而精细的细胞膜 A T P 酶马达利用这些梯度产生 A T P 。膜蛋白还能收集光, 提供变构的受体而将外部分子与细胞膜的结合信息通过信号级联转导为细胞
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单向凝胶电泳实验
本书所介绍的S D S ——P A G E 方法将满足本领域大部分应用的需要。 作者: 伯吉斯等,主译:陈薇,本实验来自「蛋白质纯化指南」
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