含有多聚组氨酸标签重组蛋白纯化实验

1. 用扩增的重组病毒感染适当数量的细胞（如每个 100 mm 培养皿中 5×106 细胞），MOI 为 5～10。培养 3～5 天，直到细胞出现典型的病毒感染状态。2. 用无菌吸管轻轻吹打细胞，收集细胞和上清液，转移到离心管中。3. 4℃， 1000 g 离心 10 min。如果目的蛋白为分泌性蛋白，将上清转移到新管中，进行纯化（步骤 6)。如果目的蛋白为胞内蛋白，弃上清，洗涤细胞，将细胞沉淀在

1. 制备澄清的重组蛋白溶液（见基本方案步骤1～5)。2. 轻轻的重悬谷胱甘肽琼脂糖珠，将其倒入适当的层析柱中，使树脂自然沉降，柱中液体流尽，然后用 3～5 倍的 PBS 洗涤缓冲液洗柱 2 次，以去除附着的乙醇。让柱中液体流尽。3. 将澄清的重组蛋白溶液上柱，调整柱的流速至最大为 5 ml/min 每 ml 琼脂糖珠。保存每份流出液，进行 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，防止超出了谷胱甘肽的结合能力