含有多聚组氨酸标签重组蛋白纯化实验

实验分类：

其他实验

最新修订时间：2022-07-18

简介

在本方案中，用重组病毒储液感染 Sf 9 细胞，在感染后 2～3 天分析。分析方案依赖于表达蛋白的天然特性。本方案仅提供一些建议步骤，但不可能包括全部。根据表达蛋白的不同特性和已有的检测试剂，筛选步骤可做相应的改变。

内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》

来源：丁香实验

操作方法

备择方案含 GST 标签

1. 制备澄清的重组蛋白溶液（见基本方案步骤1～5)。2. 轻轻的重悬谷胱甘肽琼脂糖珠，将其倒入适当的层析柱中，使树脂自然沉降，柱中液体流尽，然后用 3～5 倍的 PBS 洗涤缓冲液洗柱 2 次，以去除附着的乙醇。让柱中液体流尽。3. 将澄清的重组蛋白溶液上柱，调整柱的流速至最大为 5 ml/min 每 ml 琼脂糖珠。保存每份流出液，进行 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，防止超出了谷胱甘肽的结合能力