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4 种常用的蛋白纯化标签说明

IBA生命科学

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蛋白纯化的方法很多,如层析法、电泳法、超离心法、超滤等,其中蛋白质亲和层析法通常只需要一步操作便能将目标蛋白从混合物中分离出来,且纯度很高,因而备受实验者的青睐。

在进行蛋白表达时,选择合适的标签有利于蛋白的纯化,促进蛋白的可溶性,因此了解几种常用的蛋白纯化标签很重要。一般来说,常用的蛋白纯化标签主要有 His tag、GST tag、MBP tag、NusA tag、Strep tag 等,那么这些蛋白纯化标签有什么不同之处呢?

His tag(组氨酸标签) 融合蛋白是目前最常用的表达方式,其优点是标签小,纯化步骤简便,纯化条件温和,能纯化可溶性/包涵体蛋白,一般不会影响蛋白的功能结构,且可以纯化出大量的目标蛋白,但该标签不适合易氧化蛋白或膜蛋白的纯化。
GST tag(谷胱甘肽巯基转移酶) 的洗脱条件温和,有助于保持蛋白功能活性,适合 pull-down 检测,具有很好的线性动态范围。但缺点是分子量较大,可能会影响蛋白质的功能和下游实验。另外,如果蛋白不可溶,很难用变性的方法进行纯化。 


MBP tag(麦芽糖结合蛋白标签) 可以减少目标蛋白的降解,增加蛋白的表达量和稳定性,提高表达产物的水溶性,但缺点是标签较大,对蛋白的结构和功能会有一定影响。 NusA tag(转录终止/抗终止蛋白标签) 不具有独立的纯化标签功能,需要和其他标签 (如 His 标签) 联用,可提高蛋白质的溶解性,但由于分子量较大,对蛋白下游应用会有影响。

Strep tag(strep 标签) 能产出高纯度 (95%) 的目标蛋白,且能保持目标蛋白活性,主要是因其纯化流程温和。其次,该标签能进行变性条件下的纯化,还可用于固定目标蛋白,检测蛋白质交互作用,或更进一步用于筛选治疗用蛋白质,或工业用酵素。但 Strep tag 纯化系统的价格相对 His tag 而言较高,所产出的目标蛋白数相对较少。

常用的几种蛋白纯化的标签就介绍到这里了,希望对您的选择有所帮助。

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