常用蛋白标签、序列及特性

常见表位标签和序列

常用表位标签的生物化学特性总结如下：

氯霉素乙酰转移酶（CAT）

这个 24kDa 大小的标签也用作报道基因，与大多数蛋白质融合时依然能保留其活性。这意味着它可以用来直接测量表达水平，而不需要 PAGE 或免疫检测。

二氢叶酸还原酶（DHFR）

这个 25kDa 蛋白质参与胸苷生物合成途径。带有这个标签的蛋白质的纯化可以通过甲氨蝶呤连接的树脂实现。

FLAG

带电的八肽序列（DYKDDDDK），可用于蛋白检测，特别是在串联为 3xFLAG™表位（DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDK）时。这有助于研究低丰度蛋白质和优化难以表达的蛋白质项目。它也是一个很好的纯化标签。FLAG 序列还含有肠激酶切割位点，如果标签位于 N 端，切除后不留多余的残基。

谷胱甘肽 S - 转移酶（GST）

GST 是最早被使用的表位标签之一；它可以置于 N 或 C 端并可以蛋白质的可溶表达。用谷胱甘肽结合树脂进行纯化。

绿色荧光蛋白（GFP）

在表位标签中独一无二，GFP 是一种自发荧光的 27 kDa 标签，可通过荧光显微镜直接在活细胞中检测到。

血凝素 A（HA）

HA 来自流感血凝素蛋白的结合结构域，含有高比例的带电残基（YPYDVPDYA），因此可能形成强烈的抗体识别位点。

组氨酸（His）

这是目前使用最广泛的纯化标签；它允许用镍亲和树脂进行纯化。这些树脂可耐受变性条件（可用于从包涵体中纯化变性溶解的蛋白质）并可重复使用。结合特异性低于抗体树脂，因此通常需要额外的纯化步骤。酸性洗脱已被用作咪唑的低盐替代物，钴可用于代替镍以提高特异性。金属蛋白和富含组氨酸的蛋白质（例如氯霉素乙酰转移酶）也与这些树脂结合，所以建议使用合适的对照。

单纯疱疹病毒（HSV）

HSV 来源于糖蛋白 D 前体包膜蛋白并且短（QPELAPEDPED），所以它不太可能干扰蛋白质结构或功能。

荧光素酶

常用于检测蛋白表达的报道基因。可以通过免疫学方法验证结果。

麦芽糖结合蛋白（MBP）

该标签的大小（43kDa）有助于其增加大肠杆菌中可溶性蛋白质的产量。与 GST 和硫氧还蛋白一起，它作为促溶标签也十分受欢迎。使用低成本的直链淀粉树脂（标签和蛋白质之间的 Asn10 spacer 能增强与树脂的结合能力）实现纯化。

c-Myc

c-Myc（或 myc）已广泛用于免疫印迹，免疫沉淀和流式细胞术。它的小尺寸（EQKLISEEDL）意味着它不太可能干扰（或增强）蛋白质折叠，可置于蛋白质的 N 端和 C 端。

Protein A 和 protein G

这些细菌超抗原可以与 IgG 结合。可以将它们与蛋白质融合以使用 IgG 进行纯化，但它们通常用于抗体检测和抗体纯化。

链霉亲和素 / 生物素

链霉亲和素 - 生物素相互作用的亲和力（10 - 14 M）意味着它可以承受苛刻的条件，所以它常用来固定蛋白质（例如在蛋白质芯片的生产中）。链霉抗生物素蛋白可以以全长，截短或突变的形式与目标蛋白融合。

T7

这是来自 T7 噬菌体的基因 10 产物的 260 个残基的标签；可增强大肠杆菌中的表达水平。

硫氧还蛋白

尽管其尺寸很小（11kDa），但硫氧还蛋白作为促溶标签非常有效（与所有增溶标签一样，溶解度不一定意味着功能性折叠，并且融合蛋白可能在其标签被切割时发生沉淀）。硫氧还蛋白有个独特的性质，就是耐高温，在高达 80°C 的温度下稳定，并且可以赋予其融合伴侣一定的热稳定性。这样，细胞蛋白可以经热变性处理而不影响融合蛋白。纯化可以使用苯基胂氧化物树脂或抗体共轭树脂来实现。

V5

来源于副粘病毒 SV5 的 P / V 蛋白的 95 - 108 位氨基酸（GKPIPNPLLGLDST）。

水泡性口炎病毒糖蛋白（VSV-G）

VSV-G

氨基酸序列为（YTDIEMNRLGK）。

酵母双杂交标签：B42，GAL4，LexA，VP16

这些标签用于酵母双杂交系统中的蛋白质相互作用，可作为 DNA 结合（GAL4，LexA）结构域；转录激活因子（B42，GAL4，VP16）