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蛋白表达与分析

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siRNA 表达载体的构建

siRNA表达载体构建可应用于：（1）作为后基因组时代基因功能分析的有力工具；（2）基因组学、细胞信号传导通路分析；（3）药物靶点筛选、疾病治疗。

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表达蛋白检测实验

蛋白表达常用检测实验，包括免疫印迹法、免疫沉淀法、点印迹法等。

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稳定表达ECFP、EGFP、EYFP和（或）DsRed蛋白的细胞系的建立

稳定表达 ECFP、EGFP、EYFP 和（或）DsRed 蛋白的细胞系的建立是用流式细胞仪同时检测四色荧光蛋白要求这些细胞要表达每一种蛋白，同时，能够表达多个荧光蛋白的细胞可以用来确认分群的正确性。

操作方法所属实验：荧光报告蛋白的多参数流式细胞术

腺病毒介导EGFP基因转染神经干细胞

0.2 ml。将24孔板置于37℃、5%CO2培养箱中培养，4 h后用DMEM/F12清洗细胞2次，弃病毒残液。每8 h观察EGFP的表达情况，常规半量换液。转染后48 h，在200倍荧光显微镜下，随机选取5个视野，分别计算绿色荧光阳性细胞百分数，用以代表Ad/EGFP对NSCS的转染效率。三、Ad/EGFP体外转染对神经干细胞增殖的影响各组分别在第7天、第14天、第21天细胞传代时各取100 μl，用台盼蓝染色并计算细胞活力，计算公式为：细胞活力（%） = （细胞总数-死亡细胞数）/细胞总数×

操作方法所属实验：非整合型载体介导的基因导入技术

问我想把pET28a-EGFP转染到BSR细胞里，检测一下BSR细胞T7聚合酶的表达

土井挞克树

pET28a乳糖操纵子转到细胞里没有IPTG诱导一般不表达，建议后续添加，不然实验无法成功。

实验问答2 回答210 围观

问求助｜请问各位大佬有用mRFP-EGFP-LC3腺病毒转染淋巴细胞吗

土井挞克树

淋巴细胞是比较难，先把细胞培养稳定再用质粒转染。

实验问答2 回答285 围观

【求助】SIN18-pRLL-hEFIap-EGFP-WRPE

gtwyx 慢病毒包装质粒SIN18-pRLL-hEFIap-EGFP-WRPE，求图谱。 gtwyx-fd@163.com希望得到各位战友的帮助！ freecell Write to author for it. http://www.nature.com/mt/journal/v3/n1/abs/mt200115a.html gtwyx 谢谢楼上的战友。我想知道国内有没有

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【求助】【求助】积分换质粒，急求pIRES2-EGFP，pBudCE4.1

lwjssry 【求助】积分换质粒，急求pIRES2-EGFP，pBudCE4.1 求pIRES2-EGFP，pBudCE4.1，积分交换，详见 http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=133&id=11398213&sty=1&tpg=1&age=0 kaige88 支持把，获得pIRES2-EGFP可要通知我哦！也想用到此质粒，呵呵。。。 lwjssry

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表达与纯化的平行方法实验

蛋白质的性质是多种多样的，这使得使用平行方法表达和纯化蛋白质具有挑战性。平行方法尤其可以应用在需要一种目标蛋白质的多种衍生物，以及需要多个同系物时。典型的方案包括对目标的评价、目标的克隆和诱变、表达筛选、大规模的表达和纯化，以及对所产生蛋白质的分析和生物物理测试。本章介绍了一些用于平行蛋白质表达和纯化的策略及方法。作者：伯吉斯等,主译：陈薇，本实验来自「蛋白质纯化指南」

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基于小 RNA 病毒的表达载体

小 R N A 病毒包括一大群小的、无荚膜的、正义单链R N A 病毒。小 R N A 病毒的生活周期很快，完全在细胞质内进行，而不需要整合到宿主细胞的基因组或经历一个核相。由于它们在生物学和遗传学上的局限性，其在通常的基因转移上的应用受到了限制。然而，它们可能适于作疫苗载体。此外，小 R N A 病毒介导的多种报道基因或者外源 R N A 元件（foreign R N A d e m e n t ) 的表达都令小R N A 病毒分子病毒学家们非常感兴趣.作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟

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条件性表达FLAG标记

1. 将蛋白编码序列克隆到一个含有 FLAG 抗原序列的四环素调控表达的质粒中，如 pTetCMV-F°（S）。2. 混合 10 μg 线性化的四环素调控的 FLAG 标记蛋白表达质粒 [如使用 PvuI 来线性化大多数 pTetCMV - F°（S）衍生构建物] ，50 μg 剪切过的小牛胸腺 DNA 和 0.5 μg SacI 线性化、含有潮霉素筛选标记的 pREP4 至电穿孔杯。3. 胰酶-EDTA 处理后合并几个 100 mm 细胞培养皿的 HtTA-1 细胞（或其他表达四环素调控

操作方法所属实验：抗原标记蛋白复合体纯化实验

花青素表达的定量

1. 瞬时表达研究植物组织经基因枪转化培养大约 12 h 后，转化细胞开始表现出深红色或者偶尔为深蓝色的斑点。颜色常常会向整个液泡扩散，从外表上看整个细胞都是红色的。在几天时间里，颜色将会增强，并且能在 1~2 周内保持稳定。对于有些细胞来说，其深色液泡内含物中的花青素或者 AVI [ 27 ] 会隐退，或者随着时间的推移慢慢地沉积下来，在这种情况下个体转化细胞更难以判断。尽管大量的细胞积累花青素后，可以用肉眼观察，但是统计转化细胞数目需要一台低倍立体显微镜。小麦品种 Cadenza

操作方法所属实验：报告基因实验

问构建mCherry与eGFP共表达质粒，应该选择哪种mCherry呢？

实验问答277 围观

问插入序列与egfp之间序列有很多碱基会引起突变吗

juyue2010

可能会，最好是将中间序列去掉，仅保留少量碱基，

实验问答3 回答437 围观

表达EGFP的质粒和目的基因共转染并流式检测

在基因功能研究过程中，常常使用的一种方法就是将目的基因转到靶细胞内进行瞬时表达（transient expression），以流式细胞仪检测细胞周期的变化，观察转基因对细胞增殖的影响。由于各种转基因方法的不同，转基因的效率也不同，往往是仅有一部分细胞可以表达目的基因，没有转基因的细胞将影响检测的结果。如何将已经转基因的细胞同未转基因的细胞区分开来进行检测，是一个技术上的难点。常用的一种方法就是将表达绿色荧光蛋白的质粒和目的基因共转染；在共转染时，加入目的基因表达质粒的量远高于表达GFP质粒

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RNAi表达载体构建

近年来的研究表明,一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型, 称为RNA干扰（RNA interference,RNAi）.siRNA（small interfering RNAs）就是这种短片断双链RNA分子,能够以序列同源互补的mRNA为靶目标,降解特定的mRNA.RNAi的发现具有划时代的意义,它不仅深入揭示了细胞内基因沉默的机制,而且它还是后基因组时代基因功能分析的有力工具,极大地促进了人类揭示生命

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表达谱基因芯片实验

表达谱基因芯片可应用于：（1）疾病诊断；（2）新药开发；（3）环境保护。

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IPTG 诱导蛋白表达实验

用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）作为诱导剂诱导蛋白表达

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siRNA表达载体的构建

目标序列设计3-4对siRNAs，选择最有效的进行后续研究。3. 设计阴性对照一个完整的siRNA实验应该有阴性对照，作为阴性对照的siRNA应该和选中的siRNA序列有相同的组成，但是和mRNA没有明显的同源性。通常的做法是将选中的siRNA中的碱基序列打乱。当然，同样要保证它和其他基因没有同源性。三、表达载体的选用 1. 化学合成与体外转录方法都是在体外得到siRNA后再导入细胞内，但是这两种方法主要有两方面无法克服的缺点：siRNA进入细胞后容易被降解；进入细胞siRNA在细胞

操作方法所属实验：siRNA 表达载体的构建