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siRNA 表达载体的构建
siRNA表达载体构建可应用于:(1)作为后基因组时代基因功能分析的有力工具;(2)基因组学、细胞信号传导通路分析;(3)药物靶点筛选、疾病治疗。
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基于小 RNA 病毒的表达载体
小 R N A 病毒包括一大群小的、无荚膜的、正义单链R N A 病毒。小 R N A 病毒的生活周期很快,完全在细胞质内进行,而不需要整合到宿主细胞的基因组或经历一个核相。由于它们在生物学和遗传学上的局限性,其在通常的基因转移上的应用受到了限制。然而,它们可能适于作疫苗载体。此外,小 R N A 病毒介导的多种报道基因或者外源 R N A 元 件 (foreign R N A d e m e n t ) 的表达都令小R N A 病毒分子病毒学家们非常感兴趣.作者:T.弗里德曼等,译者:殷勤伟
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siRNA表达载体的构建
目标序列设计3-4对siRNAs,选择最有效的进行后续研究。3.  设计阴性对照 一个完整的siRNA实验应该有阴性对照,作为阴性对照的siRNA应该和选中的siRNA序列有相同的组成,但是和mRNA没有明显的同源性。通常的做法是将选中的siRNA中的碱基序列打乱。当然,同样要保证它和其他基因没有同源性。 三、表达载体的选用 1.  化学合成与体外转录方法都是在体外得到siRNA后再导入细胞内,但是这两种方法主要有两方面无法克服的缺点:siRNA进入细胞后容易被降解;进入细胞siRNA在细胞
操作方法所属实验:siRNA 表达载体的构建
🔥 过表达载体的构建
表达载体是将目的基因 CDS 编码区构建到相应的质粒或者病毒载体中,从而在宿主细胞中高效表达大量目的蛋白的质粒载体。过表达载体有多种构建方法,这里介绍一种常见方法——同源重组法。
操作方法所属实验:基因过表达构建实验
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RNAi表达载体构建

奥秘的进程.现在越来越多的研究人员开始采用RNAi 来研究生物体的基因表达.RNAi技术可广泛应用到包括功能基因组学,药物靶点筛选,细胞信号传导通路分析,疾病治疗等等.目前为止较为常用的5种制备siRNAs的方法包括:·化学合成·体外转录·长片断dsRNAs经RNase III 类降解 (e.g. Dicer, E. coli, RNase III)·siRNA表达载体或者病毒载体在细胞中表达siRNAs·PCR制备的siRNA表达框在细胞中表达获得高纯度的siRNA产物是进行实验的第一步,而转染

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【求助】正、反义表达载体??

arthur1999 :(正、反义表达载体 是什么意思,我不明白,请大家赐教。不胜感激!!! freecell 正反义表达载体就是把目的基因正向或者反向插入到质粒中再转染 质粒中含有正向插入目的基因的就是正义表达载体 含有反向插入的就是反义表达载体 arthur1999 学习,谢谢了 本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫

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靶向 EGFR 基因 siRNA 表达载体的构建
利用Lipofeetamine2000将构建的psj-EGFR载体转入A549细胞中,应用实时定量荧光PCR、免疫荧光和流式细胞仪检测EGFR基因mRNA和蛋白水平的表达,并采用四甲基偶氮唑蓝显色法(MTT)、集落形成实验观察细胞生长变化。
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Tec 真核表达载体构建及其对细胞信号的影响实验
Tec(Tyrosinekinaseexpressedinhepatocelluar carcinoma)是一种重要的非受体型酪氨酸激酶,最早由Mano等,从肝癌组织中克隆。人Tec编码框是由1893个碱基组成的开放读码框,编码630个氨基酸组成的分子量为73 ku 的蛋白质,由PHdo main、THdomain、SH3domain、SH2domain和Kinase domain四部分组成。
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将荧光蛋白表达载体转染到细胞
将荧光蛋白表达载体转染到细胞实验基本过程可分为以下几步:A. 采用下述载体和方法建立稳定表达荧光蛋白的 Jurkat 和 P19 EC 细胞。将 pIV 质粒电转到 Jurkat 细胞(SC,Pruitt,未发表数据)。P19 EC 细胞则电转入 pIV 或基因捕获载体而构建基因捕获文库,如图 13-1B 所示。基因捕获载体的特点是从 5'到 3'端包含有一个剪切位点,一个三联的转录终止序列,后者可以终止转录内源性蛋白,另外还有一个内在的核糖体插入位点和一个报告基因(如 EGFP),一个
操作方法所属实验:荧光蛋白表达细胞的流式细胞术分析
基因重组—层析法
,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。 三、构建重组表达载体 1.  载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。 2.  PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。 四、获得含重组表达质粒的表达菌种 1.  将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。 2.  
操作方法所属实验:蛋白质的表达、分离、纯化实验
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【求助】求助~过表达载体

ono1180 求助各位同道: 我想过表达一个基因,想选用一个质粒载体连接此基因再转染入细胞,选用的载体需要有绿色荧光标记,而且能筛选出稳定转染的细胞系,上网查了一下觉得pEGFP系列的好像符合我的要求。 请问这个载体怎么样,大家还有什么载体觉得挺好,请指教,感谢了。 xiaokangkuaile 我用的是pEGFP-C1表达载体,但我的目的基因对GFP表达有影响,转染效果很差

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QIAgenes 预制蛋白表达载体

蛋白纯化领域的客户肯定不陌生,该公司拥有His标签蛋白纯化的金标准Ni-NTA的专利(也是因为专利在手,QIAGEN也为其他一些公司代工生产Ni-NTA)。值得一提的是QIAGEN最近几年在蛋白研究领域推出了一系列新产品,如天然蛋白制备和蛋白结晶产品线等。 这次QIAGEN和GeneArt强强联手,利用GeneArt的GeneOptimizer™ 平台以及QIAGEN在原核表达领域的经验,推出了QIAgene 预制表达载体(QIAgene Expression Kits—E.coli,专门针

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真核表达文库的构建与筛选实验
类似方案 1、方案 2 描述了在真核表达载体上进行 cDNA 文库构建与筛选的方法, 流程分为以下两个阶段:1. 在真核表达载体上构建 cDNA 文库;2. 在真核表达载体上构建的 cDNA 文库的筛选。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)上册,作者:黄培堂。
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基因过表达构建实验
表达载体是将目的基因 CDS 编码区构建到相应的质粒或者病毒载体中,从而在宿主细胞中高效表达大量目的蛋白的质粒载体。过表达载体有多种构建方法,这里介绍一种常见方法——同源重组法。
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用λ噬菌体 PL 启动子在大肠杆菌中表达克隆基因实验
的 LB 培养基备选,参见步骤 13。M9 基本培养基灭菌后补加 0.5%(m/V) 葡葡糖,0.2%(m/V) 酪蛋白酸水解物和所需抗生素,用于色氨酸诱导的表达载体。离心机和转头SorvallGSA 转头或相当的转头特别配备沸水浴设定为 30°C 和 40°C 的振荡培养器只有使用λ噬菌体 cI 基因的温度敏感型等位基因时才需要。补充试剂本方案步骤 1 需要第 8 章方案 7 中所列试剂。本方案步骤 2 需要第 1 章方案 17 或 19 中所列试剂。本方案步骤 3 需要第 1 章方案 23~26
操作方法所属实验:用λ噬菌体 PL 启动子在大肠杆菌中表达克隆基因实验
🔥 芽孢杆菌表达系统
1. 将目的基因连接到穿梭的表达载体上,载体中通常包含启动子、选择性标志基因和表达缩短型的蛋白质所需要用到的基因信息,转化到大肠杆菌 DH5α感受态中,涂在含相应抗性的 LB 平板上,37 ℃ 过夜培养。2. 筛选阳性转化子,转入 LB 液体培养基中,37 ℃,200 rpm/min 培养 12~16 h,取 2~4 mL 菌液于 2 mL 的 EP 管中,按质粒提取试剂盒说明书提取质粒。3. 将冻存于 -80 ℃ 的芽孢杆菌菌液在 LB 平板上划线,放置于 37 ℃ 恒温培养箱中,过夜
操作方法所属实验:🔥 蛋白质的原核表达
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