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反转录-聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量的RNA样品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。

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聚合酶链反应构建重组 DNA

聚合酶链反应构建重组DNA用途广泛（1）用于测序引物（2）定点突变（3）核酸杂交探针（4）PCR引物。

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小载体聚合酶链反应

1)准备小载体PCR，合成锚定囊泡引物。形成锚形囊泡如下：a.配置一种水溶液，这种溶液中含有2〜4 mmol/L的每种锚定囊泡引物1和2。b.在加热块上以95℃孵育5 min变性。c.加入1 mol/L MgCl2至溶液终浓度为2 mmol/L通过从底部装置撤掉加热块并将其放在试验台上直至冷却到室温使其变性。-20℃储存至第5步。2)合成普通小载体（UV)引物。合成与产生插入文库的mTn互补的引物（mTn引物)。如果使用LacZ插入文库，推荐以下序列为mTn引物：5'-CGC CAG GGT

操作方法所属实验：酵母菌基因组转座子的诱变实验

反转录-聚合酶链反应

反转录-聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）使 RNA 检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量的 RNA 样品分析成为可能。

操作方法所属实验：定性 PCR 实验

问荧光免疫 PCR 用什么仪器获得不同颜色标记的结果？

苍狼-huahua

现在市场上的PCR仪器多种多样，各自采用获取荧光标记结果的方式大不相同。现在潮流方向是用荧光探针(带有标记基因的片段和荧光基团)参与聚合酶链反应，当荧光强度达到机器可以判读的阈值，系统的原始扩增曲线就会上扬。

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问有没有测甲基化相关酶活性的方法？

huarenqiang5

传统用于检测DNA甲基化酶活性的方法包括高效液相色谱法(HPLC)， 聚合酶链反应(PCR)，凝胶电泳，高效毛细管电泳(HPCE)，以及使用同位素标记的s-腺苷甲硫氨酸甲基化检测。替代的DNA甲基化酶活性测定方法，如放射法、比色法、荧光法、电化学法等。

实验问答4 回答933 围观

聚合酶链反应

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction)简称ＰＣＲ，是一项在短时间内大量扩增特定的ＤＮＡ片段的分子生物学技术。开发史这项技术的发明人是Kary Mullis.１９８３年，在一家生物高技术公司（Ｃｅｔｕｓ）工作的Mullis着手解决用简单的方法鉴定某一段ＤＮＡ的技术问题，有一天晚上他驱车在北部加州１０１号高速公路上，灵机一动想到了一个实际上可以无限扩增某段ＤＮＡ的简单方法，即ＰＣＲ。在１９８５年的一次学术会议上，此方法首次被介绍，在分子生物科学家中也引起了链反应

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定量聚合酶链反应(Q-PCR)测定技术及其临床应用

PCR? PCR只是一个简单的不起眼玩艺 ——凯利·穆利斯（Kary Mullis) PCR只是一个概念，所发生的奇迹是：PCR概念变成了可操作的实验系统，变成了一项成熟的技术，后者又上升成为新的概念。 … 它最大的特点就是能不断推出新形式。 —— 摘自[Making PCR: A Story of Biotechnology

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逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR，rtpcr）

逆转录-聚合酶链反应可应用于：(1）分析基因的转录产物；（2）获取目的基因；（3）合成cDNA探针；（4）构建RNA高效转录系统。

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荧光 RNA 随机引物触发的聚合酶链反应实验

差异显示聚合酶链反应（PCR) 可促进在诸多物种中与污染暴露相关的新分子标志物的鉴定。至今，已有多种差异显示方法被详细描述。这里，我们描述了一种改良的RNA 随机引物触发的 PCR 方法（RNAarbitrarily primed PCR， RAP-PCR) , 主要涉及通过罗丹明（rhodamine) 标记的 18 碱基的随机引物对 cDNA 转录物进行荧光标记。这些随机引物特异结合于 cDNA 的编码区，因此简化了下游对毒物响应基因的鉴定。这种方法被命名为突光 R N A

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反转录－聚合酶链反应

反转录－聚合酶链反应 (reverse transcriptionpolymerase chain reaction, RT-PCR ) 将 RNA 的反转录反应与 PCR 反应相结合，是最广泛使用的 PCR 方法。方法原理RT-PCR 的基本原理是以 RNA 为模板，用反转录酶合成 cDNA 链，再以 cDNA 为模板，通过 PCR 扩增合成目的 DNA 片段。RT-PCR 可检测到单个细胞中少于 10 个拷贝的特异 RNA, 是目前敏感度最高的 RNA 检测方法，可以用于低丰度的 mRNA

操作方法所属实验：定性 PCR 实验

利用聚合酶链反应制备放射性标记的DNA探针

一、材料1. 缓冲液和溶液乙酸铵（10 mol/L)10X 扩增缓冲液用于乙醇沉淀放射性标记探针的载体氯仿乙醇TE ( pH 7.6)2. 酶与缓冲液耐热的 DNA 聚合酶（如 Taq DNA 聚合酶）3. 核酸与寡核苷酸dCTP ( 0.1 mmol/L）含 dATP、dGTP 和 dTTP 各 10 mmol/L 的 dNTP 溶液正向引物（20 μmol/L）及反向引物（20 μmol/L）（水配制）模板 DNA（2~10 ng）4. 放射性复合物[α-32P] dNTP ( 10

操作方法所属实验：利用聚合酶链反应制备放射性标记的DNA探针

问请问要做肝脏脂代谢基因表达测定，需要送多少肝脏样本？

loveliufudan

对于肝脏脂代谢基因表达测定，所需的肝脏样本量可以因研究目的、实验设计和所选的实验方法而有所不同。以下是一些一般的指导原则：1. 根据实验方法选择样本量：不同的实验方法可能需要不同的肝脏样本量。例如，如果你计划使用实时定量聚合酶链反应（qPCR）来测定特定脂代谢基因的表达水平，通常每个基因至少需要约100毫克的组织样本。但具体所需样本量可能因所选的基因数目、检测灵敏度和实验技术要求而有所变化。2. 样本的数量和重复次数：除了单个样本的样本量，还需要考虑每个实验组或处理组的样本数量以及重复

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问PCR反应条件的三要素

珠海舒桐

PCR（聚合酶链反应）是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA片段。PCR反应条件的三要素通常指的是：1. 模板DNA：这是需要被扩增的DNA片段。它可以是基因组DNA、质粒DNA或任何其他形式的DNA。2. 引物（Primers）：这些是短的单链DNA片段，它们与目标DNA序列的两端互补，用于指导DNA聚合酶开始合成新的DNA链。3. 热稳定DNA聚合酶：最常见的是Taq聚合酶，它能够在PCR过程中的高温下保持活性。这种酶负责在引物的指导下合成新的DNA链。除了这三要素，PCR反应还需要

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聚合酶链反应技术

聚合酶链反应技术简称PCR技术，是一种利用DNA变性和复性原理在体外进行特定的DNA片断高效扩增的技术，可检出微量靶序列（甚至少到1个拷贝）。在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。仅需用极少量模板，在一对引物介导下，在数小时内可扩增至100万-200万份拷贝。PCR反应分三步：变性、退火及延伸。以上三步为一循环，每一循环的产物作为下一个的模板，这样经过九小时的循环，每一循环的产物作为下一个循环的模板，这样经过数上时的循环后，可得

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聚合酶链反应[PCR]

[ 实验原理 ] 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）即PCR技术是美国Cetus公司人类遗传研究所的科学家K.B.Mullis于1983年发明的一种体外扩增特定基因或DNA序列的方法。PCR具有很高的特异性、灵敏度，在分子生物学、基因工程研究、某些疾病的诊断以及临床标本中病原体检测等方面具有极为重要的应用价值。双链DNA分子在接近沸点的温度下解链，形成两条

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反转录－聚合酶链反应

PCR 是指在 DNA 聚合酶催化下，以亲代 DNA 为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸三步骤循环，在体外复制出与模板 DNA 序列互补的子链 DNA 的过程，能快速特异地在体外扩增任何目的 DNA 片段。定性、半定量和定量 PCR 技术在生物学和医学中的应用极其广泛，目前，半定量 PCR 的方法主要有 RT-PCR 等。

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利用聚合酶链反应制备放射性标记的DNA探针

本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

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🔥 反向 PCR

标准 PCR 用来扩增位于两条引物内侧的 DNA 片段，与此相反，反向 PCR 技术（也被称为倒置或者向外 PCR）是用于扩增一段已知 DNA 序列旁侧的 DNA 序列，这些序列中没有可以用于扩增的引物。在快速高效的 DNA 测序出现之前，这项技术在几个独立课题组内都得到很好的发展前，在多数情况下，测序已成为确定未知 DNA 片段的主要选择手段。然而，反向 PCR 仍旧被广泛应用于快速的等位基因分型，以及确定整合到基因组中的反转录病毒、转基因、转座子的定位。反向 PCR 要用到一种限制性内切核酸酶对大分子 DNA 酶切消化，制备一个包含已知序列及其侧翼区域的 DNA 片段。个别限制性酶切片段（哺乳动物的基因组 DNA 可能产生成千上万条片段）通过自身分子环化连接，然后这种包含已知序列的环化 DNA 可以被用来作为 PCR 模板。未知序列通过与已知序列特异结合的引物反方向扩增获得。

操作方法所属实验：反向 PCR （inverse-PCR）

荧光RNA随机引物触发的聚合酶链反应实验

##一、从组织和培养细胞中分离RNA1.TRIzol试剂（Invitrogen)。该试剂含有苯酚和硫氰酸盐化合物，操作时应穿实验服，戴手套，存放于 4°C 。2.氯仿。3.异丙醇。4.乙醇。5.焦炭酸二乙酯（DEPC) 处理的水。6.无DNA试剂盒（Ambion)。贮存于一 20°C 。##二、 CDNA 合成1.Superscript™ II， RNase H-反转录酶（200 U/(nL; Invitrogen)。一 20°C下可稳定忙存两年以上。2.5X 第一链合成缓冲

操作方法所属实验：荧光 RNA 随机引物触发的聚合酶链反应实验