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氨基酸代谢标记实验
代谢标记技术用于研究蛋白质的生物合成、加工、细胞内运输、分泌、降解和物理化学特性。 
实验概况收录 5 操作方法 · 3 相关文章
氨基酸代谢产物分析
氨基酸在体内一方面主要用以合成机体自身所特有的蛋白质、多肽及其他含氮物质;另一方面可通过脱氨作用、转氨作用、联合脱氨或脱羧作用,分解成α-酮酸、胺类及二氧化碳。氨基酸分解所生成的α-酮酸可以转变成糖、脂类或再合成某些非必需氨基酸,也可以经过柠檬酸循环氧化成二氧化碳和水,并释放能量。目前用于氨基酸代谢产物分析的方法主要有 4 种:谷氨酰胺酶活性分析、丙氨酸转氨酶活性分析、谷氨酰胺含量测定和谷氨酸含量测定。
实验概况收录 1 操作方法 · 3 相关问答 · 3 相关文章
代谢标记
1. 用 60 mm 或 100 mm 培养瓶,在完全培养基中培养细胞至所希望的密度。2. 用预热的低磷酸培养基(无放射性磷酸盐)冲洗两次,然后加入含 0.5~1 mCi32P/ml 的低磷酸培养基(50~100 μmol/L 无机磷酸)。3. 培养结束后,回收 32P 标记培养基,用 10 ml Aquasol (NewEnglandNuclear) 或 Ecolume(ICNBiomedicak) 稀释,取一等份用液闪计数器测定 32P 活性。测定培养基中磷酸浓度 (Sanui 1974
操作方法所属实验:蛋白质磷酸化的测定实验
辅助方案2重组蛋白的代谢标记
分泌型重组蛋白)或上清(分泌型重组蛋白)。如果有适用的抗体,建议将标记的裂解物先进行免疫沉淀,然后在 SDS 样品缓冲液中煮沸,并在SDS-PAGE 中分离。7. 用放射自显影使蛋白质显迹。从放射自显影图查看感染了重组病毒,而不是野生型杆状病毒的细胞是否出现预期分子质量的蛋白质。
操作方法所属实验:杆状病毒系统蛋白质表达实验
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氨基酸代谢(amino acid metabolism)

   人和动物由食物引入的蛋白质或是组成机体细胞的蛋白质和在细胞内合成的蛋白质,都必须先在酶的参与下加水分解后才进行代谢。植物与微生物的营养类型与动物不同,一般并不直接利用蛋白质作为营养物,但其细胞内的蛋白质在代谢时仍然需要先行水解。蛋白质水解生成的氨基酸在体内的代谢包括两个方面:一方面主要用以合成机体自身所特有的蛋白质、多肽及其他含氮物质;另一方面可通过脱氨作用,转氨作用,联合脱氨或脱羧作用,分解成α-酮酸、胺类及二氧化碳。氨基酸分解所生成的α-酮酸可以转变成糖、脂类或再合成

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空间代谢组原理

质谱成像(Mass Spectrometry Imaging, MSI)作为一种新型的分子影像技术,能够直接从生物组织中获得大量已知或未知的内源性代谢物和外源性药物等分子的结构、含量和空间分布信息。相对于其他成像方法(如荧光成像、放射性标记成像等),该技术无需化学或放射性标记、不需复杂样品前处理,具有高特异性、高通量和空间信息保留的突出优势。 质谱成像技术可以实现生物组织中上千代谢物的定性、定量和定位分析,结合生物信息学分析,发展为空间代谢组学方法,可从生物组织原位发现差异代谢物,并识别其生物

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离体神经突触的代谢标记实验
mRNA 和 rRNA 存在于树突和轴突内(VanMinnen1994;Steward1997)。令人疑惑不解的是,位于胞体外区域的 mRNA 是否真的被翻译。下面的方法可以证明神经突起确实可以不依赖胞体而合成蛋白。现代神经科学研究技术作者:U.Windhorst & H. Johansson  翻译:赵志奇 陈军
实验概况收录 1 操作方法 · 3 相关文章
重组蛋白质的代谢标记实验
由于重组蛋白质表达的时候,宿主蛋白质的合成基本终止,因此体内代谢标记是检测重组蛋白质的敏感方法。
实验概况收录 1 操作方法 · 2 相关问答 · 3 相关文章
离体神经突触的代谢标记实验
。12.千燥凝胶。13.在 X 射线胶片(KodakBiomaxMS) 上曝光 1~3 周。14.显影胶片三、结果为了解神经突起内蛋白的合成部位以及这些部位合成蛋白的异质性,我们应用反式-35St 示记技术通过 35S 标记的半胱氨酸和蛋氨酸标记了离体神经突起。如果离体轴突确实存在蛋白合成,那么这些放射标记氨基酸将能够掺入蛋白,并被放射自显影方法检测到。结果证明神经突起能够合成各种各样的蛋白,而且这个过程主要发生在曲张体和生长锥(图 3-6)。​
操作方法所属实验:离体神经突触的代谢性标记实验
酵母和细菌蛋白质的代谢放射标记
1. 接种细胞于只含有必需氨基酸和辅因子的已知成分的基本培养基,于合适温度中度振荡培养过夜。2. 用新鲜的基本培养基稀释培养物,继续温育至 107 细胞/ml (酵母)或对数期中期(细菌)。3. 5000 g 室温离心 10 分钟收集细胞,用无硫酸盐基本培养基重悬至 107 细胞/ml(酵母)或 5X108 细胞/ml(细菌)。4. 加 H235SO4 至终浓度 20 μCi/ml。于适宜温度轻度振荡培养 1 小时(酵母)或 20 分钟(细菌)。5. 5000 g 室温离心 10 分钟收集
操作方法所属实验:靶蛋白的放射标记实验
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空间代谢组发展

是其分析过程中所需的组织匀浆、代谢物提取、纯化和富集等前处理过程丢失了代谢物在组织中的空间分布信息。   质谱成像(Mass Spectrometry Imaging, MSI)作为一种新型的分子影像技术,能够直接从生物组织中获得大量已知或未知的内源性代谢物和外源性药物等分子的结构、含量和空间分布信息。相对于其他成像方法(如荧光成像、放射性标记成像等),该技术无需化学或放射性标记、不需复杂样品前处理,具有高特异性、高通量和空间信息保留的突出优势。质谱成像技术可以实现生物组织中上千代谢物的定性、定量和定

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PNAS | 空间分辨代谢组学方法揭示“下游代谢物与上游代谢酶关联”的癌症相关代谢变化

变化   研究结果: 1.脯氨酸生物合成上调 脯氨酸作为细胞微环境中的重要氨基酸参与细胞凋亡和自噬,在癌症代谢中的重要作用得到越来越多的关注。根据 256 个食管癌组织样本的统计数据,癌区脯氨酸离子强度显著高于上皮和肌肉区(P 图 2 | 脯氨酸生物合成途径中关键代谢物和代谢酶的原位分析   (A)脯氨酸的质谱成像(B)光学-MSI 重叠图像(C) 256 例鳞片状食管癌(ESCC)患者癌组织和相邻上皮、肌肉组织中脯氨酸水平 ***p   2.尿苷代谢上调 尿苷是 RNA 合成的重要核苷前体,也参与

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磷酸氨基酸分析实验
鉴定蛋白质中磷酸化的氨基酸残基是很有意义的。磷酸化作用发生在蛋白质的丝氨酸、苏氨酸和酩氨酸时,通过部分的HCl水解及接着进行双向薄层电泳,可以便利地鉴定 标记的磷酸氨基酸
实验概况收录 1 操作方法 · 1 相关问答 · 3 相关文章
靶蛋白的放射标记实验
本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。
实验概况收录 2 操作方法 · 3 相关文章
实质等同性(代谢组学)
本章描述的方法最适合于分析小麦精白面,但改进后也适用于全面粉、麦麸或其他组织,如叶和根。在开展实质等同性代谢组学实验前,如其他任何田间试验或温室试验一样,要考虑的关键步骤包括田间试验设计(见注 1) 、组织取样(见注 2 ) 和样本标记(见注 3) 。3.1 代谢物提取和 NMR 样品准备( 1 ) 从白面粉的每一个生物重复中,称取 3 份 30 mg ( ± 0.03 mg ) 的样品,分别装入标记好的 1.5 ml  Eppendorf 管。在整个实验中,生物重复和技术重复都要随机化(见注
操作方法所属实验:实质等同性(代谢组学)实验
一、蛋白质的纯化和肽段氨基酸序列分析
1. 蛋白质样品的准备进行序列分析的蛋白质样品,一般纯度要求大于 95%, 通常是用色谱和电泳精制过的。1.1 SDS-PAGE 纯化的样品从 SDS-PAGE 上分离的蛋白质必须经过特殊处理,使 SDS 浓度低于 0.0005%,否则 SDS 会影响到胰蛋白酶的酶解,也会明显降低 HPLC 分离时的分辨力。在 SDS-PAGE 后,采用电印迹 (bloting) 转移到 PVDF 膜上是常用的方法,因为 PVDF 膜结合蛋白质能力的专一性远远超过它与盐、氨基酸和去垢剂的结合,因此能将蛋白
操作方法所属实验:cDNA 法推断蛋白质的一级结构实验
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