材料与仪器
细胞
基本培养基
基本培养基
步骤
1. 接种细胞于只含有必需氨基酸和辅因子的已知成分的基本培养基,于合适温度中度振荡培养过夜。
2. 用新鲜的基本培养基稀释培养物,继续温育至 107 细胞/ml (酵母)或对数期中期(细菌)。
3. 5000 g 室温离心 10 分钟收集细胞,用无硫酸盐基本培养基重悬至 107 细胞/ml(酵母)或 5X108 细胞/ml(细菌)。
4. 加 H235SO4 至终浓度 20 μCi/ml。于适宜温度轻度振荡培养 1 小时(酵母)或 20 分钟(细菌)。
5. 5000 g 室温离心 10 分钟收集细胞,吸出培养基,倒入放射性废料桶。
6. 用冰冷的基本培养基重悬细胞,如第 5 步离心收集细胞。将上清倒入放射性废料桶。用巴氏滴管吸去离心管壁残存的上清。
2. 用新鲜的基本培养基稀释培养物,继续温育至 107 细胞/ml (酵母)或对数期中期(细菌)。
3. 5000 g 室温离心 10 分钟收集细胞,用无硫酸盐基本培养基重悬至 107 细胞/ml(酵母)或 5X108 细胞/ml(细菌)。
4. 加 H235SO4 至终浓度 20 μCi/ml。于适宜温度轻度振荡培养 1 小时(酵母)或 20 分钟(细菌)。
5. 5000 g 室温离心 10 分钟收集细胞,吸出培养基,倒入放射性废料桶。
6. 用冰冷的基本培养基重悬细胞,如第 5 步离心收集细胞。将上清倒入放射性废料桶。用巴氏滴管吸去离心管壁残存的上清。
来源:丁香实验