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转移并固定到膜上的 RNA 样品可以与特异的探针杂交，从而用来对所感兴趣的 RNA 进行定位。视实验人员和条件的差异，可以从多种方法中选择任意一种来标记和检测探针。用抑制非特异吸收探针的封闭试剂处理膜之后，在适于探针和固定的靶 RNA 杂交的条件下将膜同探针孵育，而后广泛洗膜以去除非特异结合的探针，最终在膜上产生一个紧密结合探针的影像分布。分析了杂交结果之后，探针可以从膜上洗去，膜可重复使用于下一个实验。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

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纯化的 RNA 的点杂交和狭线杂交

点杂交和狭线杂交技术（Kafatos et al. 1979) 用于在同一固相支持物（通常为带电荷的尼龙膜）上固定几种核酸样品，然后用合适的探针与已固定的样品杂交，并由此判断靶序列的浓度。通过估计样品点发射出的信号的强度，与已知浓度的标准品信号强度进行比较，确定待测样品中靶序列的量。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

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杂交

1. 在聚乙烯三明治盒中，把膜（最多三张膜）放入 200 ml 55°C 预热预杂交液（0.263 mol/L 磷酸氢二钠；7 % （W / V）SDS，1 mmol/L EDTA，1 % （W / V）BSA 片段 V （Roche））中。2. 55°C下，摇动盒子 4 h。3. 把膜转移到第二个三明治盒子 150 ml 55°C 预热预杂交液中，同时加人煮沸并冷却的探针。4. 摇动盒子 55°C 下过夜，至少 16 h。5. 将两张膜转移到 1 L 的严谨冲洗液中，室温下摇动该混合物 15

操作方法所属实验：细胞系的多位点 DNA 指纹检测

Northern杂交

一、材料1. 缓冲液和溶液预杂交液（0.5 mol/L pH 7.2)，7% (m/V) SDS，1 mmol/L EDTA ( pH 7.0)）SSC ( 0.5X，1X，和 2X ) 含 0.1% (m/V) SDSSSC ( 0.1X 和 0.5X）含 0.1% (m/V) SDS2. 核酸和寡核苷酸DNA 或 RNA 探针（> 2X108 cpm/μg）固定于膜上的 RNA3. 专用设备滤纸（Whamian 3 MM 或相当效果的滤纸)沸水浴预热到 68℃ 的水浴预设到杂交温度的水浴二

操作方法所属实验：Northern 杂交

问核酸斑点杂交，预杂交液和杂交液的制备

bamboopiggy

预杂交液和杂交液在灭过菌的试管里制备就可以。杂交液和预杂交液的区别就是一个加的探针，一个加的鲑鱼精DNA来封闭非特异性的吸附点。预杂交液实际上就是不含探针的杂交液，。用于制备杂交液的预杂交液需要加鲑鱼精DNA，也可以用牛血清。杂交液每100平方厘米 60ul够了，因为预杂交液不可能100%的倒出来，还是有点的。

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问酵母单杂交

Eason老歌迷

转化后如果是过夜就取出来的平板，菌落可能不会长得很大。主要还是要看放置一段时间后，菌落形态是否有变化（可以在37C继续培养，如果怕长过了，也可以放在室温下）。如果还是保持原来的状态，或者长出来更多的小菌落，则很有可能是污染。如果菌落明显在生长，而且透明度也变化了，应该是正常生长。另外，如果这一批菌生长速度明显低于平常，需要考虑是不是抗性加高了，或者IPTG加高了，抑制了菌的生长。最后如果形态与平常相似了，再做做PCR，抽质粒酶切确认一下。

实验问答1 回答3192 围观

了解核酸分子杂交

实验原理核酸分子杂交是通过配对碱基对之间的非共价键（主要是氢键）结合，从而形成稳定的双链区。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交可在 DNA 与 DNA、RNA 与 RNA 或 RNA 与 DNA 的二条单链之间进行。由于 DNA 一般都以双链形式存在，因此在进行分子杂交时，应先将双链 DNA 分子解聚成为单链，这一过程称为变性，一般通过加热或提高 pH 值来实现。用分子杂交

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如何做好 Southern 杂交？

Southern 杂交是分子生物学的经典实验方法。其基本原理是将待检测的 DNA 样品固定在固相载体上，与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的固相 DNA 的位置上显示出杂交信号。通过 Southern 杂交可以判断被检测的 DNA 样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。该项技术广泛被应用在遗传病检测、DNA 指纹分析和 PCR 产物判断等研究中。但由于该技术的操作比较烦琐、费时，所以现在有一些其他的方法可以代替 Southern 杂交。但该技术也有它的独特之处，是目前其他方法

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细胞杂交

在悬浮或单层培养细胞体系中融合细胞，用 PEG 处理细胞的时间应很短，以减少细胞的死亡。通常，在使用选择性培养基前，需给细胞 24 h 的恢复期。

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消减杂交实验

实验介绍消减杂交，本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

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纯化的RNA的点杂交和狭线杂交

一、材料1. 缓冲液与溶液NaOH ( 10 mol/L)预杂交液RNA 变性液0.1X SSC ( 含 0.1% SDS，m/V)0.1X SSC ( 含 1%SDS，m/V)0.5X SSC ( 含 0.1% SDS，m/V)1X SSC ( 含 0.1% SDS，m/V)2X SSC20X SSC2. 核酸与寡聚核甘酸RNA 检测样品、标准品和阴性对照3. 探针探针标记与变性4. 专用设备印迹装置绞链仪（如 Stratalinker, Stratagene; GS Gene Linker

操作方法所属实验：纯化的 RNA 的点杂交和狭线杂交

杂交信号的放大

1) 用生物素酰化探针与切片进行杂交、洗涤，进行第一轮杂交信号检测。对生物素酰化探针信号的放大，可在基本方案步骤8之后的任何一步进行。2) 如果切片已加盖玻片并密封，可用一针头或解剖刀片划开密封的指甲油，移去盖玻片，并除去载玻片上指甲油。将玻片浸于盛有 0.1% Triton ×-100/4×SSC的，以铝箔包裹的Coplin广口瓶15 min,轻轻摇动。如盖玻片不易松动，应小心抬起，重复洗涤2次。3) 吸去载玻片上残余溶液，在载玻片上加 50μL的1〜3μg/ml生物素酰化抗亲和素抗体，盖以

操作方法所属实验：用非同位素探针进行原位杂交和检测实验

问核酸斑点杂交，倒掉预杂交液后，加入杂交液是只要加进去就行还是要点在点样那一面上

bamboopiggy

最好还是要点在点样那一面，那样接触比较多。

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问杂交瘤融合率较低

Eason老歌迷

杂交瘤操作对于无菌要求特别高，你的操作的全部过程必须在严格无菌的条件下进行，不然它的融合率会降低很多。而且细胞融合是杂交瘤产生的中心环节，这一步关系到全部工作的成败。我可以给你一个小秘诀，就是我之前犯的错误，不能用含有蛋白的培养基配制PEG溶液。浓度低于30％的PEG融合成功率低，高于50%的PEG对细胞毒性大，然后细胞融合率上不去。

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细胞杂交

相关专题动物细胞融合也称细胞杂交(cell hybridization)，是指两个或多个动物细胞融合成一个细胞的过程，融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞(hybrid cell)基因型相同的细胞融合成的杂交细胞称为同核体(homokaryon);来自不同基因型的杂交细胞则称为异核体(heterokaryon)。细胞融合的具体步骤包括： (1)细胞准备。分贴壁和悬浮细胞两种

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原位杂交组织化学杂交体检测

原位杂交组织化学杂交体检测杂交体检测又称杂交体显示，是指通过一定方法使杂交反应形成的杂交体(杂交信号)成为在显微镜下可识别的产物。对原位杂交反应信号进行显示的方法因探针标记物不同而异。 (一)放射性核素标记探针的检测第一个原位杂交实验(1969年)以’H作为核酸探针的标记物，杂交信号用放射自显影术检测。随着原位杂交技术的推广和应用，32P、125I及35S等放射性核素均可用来标记探针，放射自显影技术也一直是用于杂交信号检测的手段之一。放射

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杂交和数据处理实验

测定每个固定化 cDNA 点上荧光度的比值，人们得以度量一个样品库中信使与另一个库中信使的相对比值。如果一系列的样品都与一个共同的参照比较的话，所有样品中信息的相对量就可以作比较，得出它们之间的相似和差异。来源：《精编分子生物学实验指南第五版》

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体细胞杂交实验

随着分子遗传学技术出现，体细胞杂交也取得了重要的进步：作为探针的 DNA 可以从用于体细胞杂交或 Southernblot 的细胞中获取，而来自相应基因的探针无论是杂交到滤膜，还是杂交到染色体的变性或非变性的片段上，都能被辨别。然而，由于人类与啮齿目动物在 DNA 和蛋白质水平上的相似性，作为杂交用的片段必须非常特异，以免与啮齿目动物发生交叉反应。利用这一技术，许多基因被成功定位，但值得注意的是：由于假基因和基因家族的存在，探针在设计时应尽量与该基因的相应片段吻合，以免与这些基因发生交叉反应。

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杂交法

1. 收集处女蝇。在做杂交前 8 h 将培养好的实验材料原有成蝇倒净。此后孵化出的雌蝇即为处女蝇。如收集后不立即做杂交 , 可将收集的雌雄果蝇分开培养 , 备用。2. 做正反交。把已麻醉的亲本果蝇按杂交要求进行杂交,每管接入5对果蝇,贴好标签,置25℃温箱培养。3. 倒亲本。7d 后 , F1 幼虫出现 , 释放亲本果蝇 (一定要释放干净)。4. 再过 3～4d, 观察 F1 成虫性状 (注意正反交的差别 , 考察眼色和性别的关系)。5. 所出现的 F1 雌雄果蝇麻醉后 , 挑

操作方法所属实验：果蝇的伴性遗传实验

Southern 杂交法

30 min 或 -20℃ 放置过夜。11. 4℃ 以最大转速离心 10 min，弃上清。12. 用冰浴的 70% 乙醇洗涤，空气中晾干。13. 用 100 μl pH 7.8 的 TE 缓冲液溶解沉淀。14. HindIII 限制酶消化 15 μl DNA 溶液，Southern 印迹及杂交分析鉴定。

操作方法所属实验：痘苗 DNA 检测实验