原理
转移并固定到膜上的 RNA 样品可以与特异的探针杂交，从而用来对所感兴趣的 RNA 进行定位。视实验人员和条件的差异，可以从多种方法中选择任意一种来标记和检测探针。用抑制非特异吸收探针的封闭试剂处理膜之后，在适于探针和固定的靶 RNA 杂交的条件下将膜同探针孵育，而后广泛洗膜以去除非特异结合的探针，最终在膜上产生 一个紧密结合探针的影像分布。分析了杂交结果之后，探针可以从膜上洗去，膜可重复使用于下一个实验。
材料与仪器
DNA 或 RNA 探针
预杂交液 SSC
滤纸 沸水浴 水浴
预杂交液 SSC
滤纸 沸水浴 水浴
步骤
一、材料
1. 缓冲液和溶液
预杂交液（0.5 mol/L pH 7.2)，7% (m/V) SDS，1 mmol/L EDTA ( pH 7.0)）
SSC ( 0.5X，1X，和 2X ) 含 0.1% (m/V) SDS
SSC ( 0.1X 和 0.5X）含 0.1% (m/V) SDS
2. 核酸和寡核苷酸
DNA 或 RNA 探针（> 2X108 cpm/μg）
固定于膜上的 RNA
3. 专用设备
滤纸（Whamian 3 MM 或相当效果的滤纸)
沸水浴
预热到 68℃ 的水浴
预设到杂交温度的水浴
二、方法
1. 在 10~20 ml 预杂交液中 68℃ 温育膜 2 h。
2. 若使用双链探针，在 100℃ 下加热 32P 标记的双链 DNA 5 min，使之变性，然后迅速移至冰水中冷却。
3. 把变性的或单链放射性标记的探针直接加到预杂交液中，在合适的温度下继续温育 12~16 h。
4. 杂交后，将膜从塑料袋中取出，在室温下迅速转移到含有 100~200 ml 1X SSC，0.1% SDS 的塑料盒内，将盒盖好，置于水平振荡器上，温和振荡 10 min。
5. 将膜转移至另一含有 100~200 ml 预热至 68℃、含 0.1% SDS 的 0.5X SSC 的塑料盒中。68℃ 下温和振荡 10 min。
6. 重复步骤 5，再洗涤至少 2 次，使 68℃ 下共洗涤 3 次。
7. 在印迹纸上晾干膜，然后让膜于 -70℃ 下在含增感屏的暗盒内对 X 线片（Kodak XAR-5 或相应的胶片）放射自显影 24~48 h。此外，也可通过磷图像系统扫描得到膜上的图像。
1. 缓冲液和溶液
预杂交液（0.5 mol/L pH 7.2)，7% (m/V) SDS，1 mmol/L EDTA ( pH 7.0)）
SSC ( 0.5X，1X，和 2X ) 含 0.1% (m/V) SDS
SSC ( 0.1X 和 0.5X）含 0.1% (m/V) SDS
2. 核酸和寡核苷酸
DNA 或 RNA 探针（> 2X108 cpm/μg）
固定于膜上的 RNA
3. 专用设备
滤纸（Whamian 3 MM 或相当效果的滤纸)
沸水浴
预热到 68℃ 的水浴
预设到杂交温度的水浴
二、方法
1. 在 10~20 ml 预杂交液中 68℃ 温育膜 2 h。
2. 若使用双链探针，在 100℃ 下加热 32P 标记的双链 DNA 5 min，使之变性，然后迅速移至冰水中冷却。
3. 把变性的或单链放射性标记的探针直接加到预杂交液中，在合适的温度下继续温育 12~16 h。
4. 杂交后，将膜从塑料袋中取出，在室温下迅速转移到含有 100~200 ml 1X SSC，0.1% SDS 的塑料盒内，将盒盖好，置于水平振荡器上，温和振荡 10 min。
5. 将膜转移至另一含有 100~200 ml 预热至 68℃、含 0.1% SDS 的 0.5X SSC 的塑料盒中。68℃ 下温和振荡 10 min。
6. 重复步骤 5，再洗涤至少 2 次，使 68℃ 下共洗涤 3 次。
7. 在印迹纸上晾干膜，然后让膜于 -70℃ 下在含增感屏的暗盒内对 X 线片（Kodak XAR-5 或相应的胶片）放射自显影 24~48 h。此外，也可通过磷图像系统扫描得到膜上的图像。
来源：丁香实验
