Northern杂交

Northern 杂交

 

1． 在 10~20 ml 预杂交液中 68 ℃温育膜 2h 。

2． 若使用双链探针，在 100 ℃下加热 ³² P 标记的双链 DNA 5 min ，使之变性，然后迅速移至冰水中冷却。

3． 把变性的或单链放射性标记的探针直接加到预杂交液中，在合适的温度下继续温育 12~16h 。

4． 杂交后，将膜从塑料袋中取出，在室温下迅速转移到含有 100~200ml 1 × SSC ， 0.1%SDS 的塑料盒内，将盒盖好，置于水平振荡器上，温和振荡 10 min 。

5． 将膜转移至另一含有 100~200ml 预热至 68 ℃、含 0.1%SDS 的 0.5 × SSC 的塑料盒中。 68 ℃下温和振荡 10min 。

6． 重复步骤 5 ，再洗涤至少 2 次，使 68 ℃下共洗涤 3 次。

7． 在印迹纸上晾干膜，然后让膜于 -70 ℃下在含增感屏的暗盒内对 X 线片（ Kodar XAR-5 或相应的胶片）放射自显影 24~48h 。此外，也可通过磷图像系统扫描得到膜上的图像。