随着分子遗传学技术出现,体细胞杂交也取得了重要的进步:作为探针的 DNA 可以从用于体细胞杂交或 Southernblot 的细胞中获取,而来自相应基因的探针无论是杂交到滤膜,还是杂交到染色体的变性或非变性的片段上,都能被辨别。然而,由于人类与啮齿目动物在 DNA 和蛋白质水平上的相似性,作为杂交用的片段必须非常特异,以免与啮齿目动物发生交叉反应。利用这一技术,许多基因被成功定位,但值得注意的是:由于假基因和基因家族的存在,探针在设计时应尽量与该基因的相应片段吻合,以免与这些基因发生交叉反应。
单层全细胞融合实验
基本方案 单层全细胞融合
1.倘若不知道细胞的选择条件,通过以下方式来确定:将培养于 25 cm 培养瓶中的受体细胞传代,比例为 10:1,分装于不同培养瓶中,并用不同水平的选择试剂来培养。
每周 2 次观察细胞,换液,10d 之后确定抑制细胞生长的试剂的最低浓度。
2.在融合前的当天下午,将等量的供体细胞和受体细胞(通常为 5X105?IXlO6 个) 培养于含