原位杂交组织化学杂交体检测
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1959
原位杂交组织化学杂交体检测
杂交体检测又称杂交体显示，是指通过一定方法使杂交反应形成的杂交体(杂交信号)成为在显微镜下可识别的产物。对原位杂交反应信号进行显示的方法因探针标记物不同而异。
(一)放射性核素标记探针的检测
第一个原位杂交实验(1969年)以’H作为核酸探针的标记物，杂交信号用放射自显影术检测。随着原位杂交技术的推广和应用，32P、125I及35S等放射性核素均可用来标记探针，放射自显影技术也一直是用于杂交信号检测的手段之一。
放射自显影是利用感光乳胶记录被研究材料中放射性物质分布和定位的方法。在原位杂交中，放射自显影术的基本过程包括：组织切片中结合在探针上的放射性核素以某种射线使感光乳胶曝光，形成潜影，再经显影、定影和水洗等程序获得影像。所形成的影像是与放射性标记物分布和活度一致的正像，即有曝光的部位形成黑影，放射性越强，曝光形成的黑影越深。
放射自显影检测技术具有敏感性高和易于定量分析等优点。但是。由于放射性核素对人体的辐射和半衰期短，使应用受到限制。
放射性同位素标记探针的原位杂交
(二)非放射性标记探针的检测
根据标记物的不同，非放射性标记探针原位杂交信号的显示方法也不同，如果用荧光素标记探针，杂交信号可直接在荧光显微镜下观察，如果用辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记探针，原位杂交信号可用相应底物的酶促反应来显示。目前．常用非放射性标记物多为半抗原，以半抗原标记探针的原位杂交信号可通过免疫酶组织化学或亲和组织化学技术显示。如用生物素标记探针进行原位杂交，带有标记探针的杂交体可以根据亲和素―生物素亲和组织化学原理，或生物素―抗生物素抗体的免疫细胞化学原理进行检测。以地高辛标记探针在进行原位杂交反应后，可根据免疫组织化学原理，用结合有酶(如HRP或AKP)或荧光素的抗地高辛抗体
与标记在探针上的地高辛进行免疫反应，再用相应底物显示酶促反应或在荧光显微镜下观察荧光间接显示杂交体的存在。
地高辛标记探针的原位杂交
