为什么全胚化学原位杂交阴性对照还有颜色信号

正常情况下阴性对照是不能有颜色信号的。如果你做的全胚化学原位杂交实验阴性对照每次都有颜色信号的话，通常是由于探针或抗体滞留于胚胎体腔和体室以及杂交后漂洗的条件不够严格等。杂交预处理前，将胚胎在解剖镜下用细针在脑室、颈背部、颌面部和心室等处刺孔，以使反应后的探针或抗体不在这些部位滞留。并在漂洗时充分洗除。同时。杂交后使用RNA酶充分消化未杂交的标记RNA探针，提高杂交后漂洗的严格度，抗体反应后充分漂洗均能降低背景信号，提高信噪比。

可能是你在加抗体时干片了，没有洗干净，或者是你显色时间太长了，没有把非特异的显色洗下去，产生了假阳性信号。

在全胚化学原位杂交实验中，阴性对照通常用来确定实验中的非特异性杂交信号。阴性对照样本不应该产生特异性的信号，因为它们不含目标基因或RNA的序列。

然而，有时阴性对照样本可能出现一些颜色信号，可能有以下几个可能的原因：

1. 杂交信号的非特异性结合：即使阴性对照样本不含目标基因或RNA序列，但在实验过程中，一些非特异性结合可能仍然发生。这些非特异性结合可能来自于杂交探针的非特异性结构或其他非特异性相互作用。

2. 杂交信号的背景噪音：实验中可能存在一些背景噪音，例如杂交探针与非特异性RNA或DNA序列结合，产生一些低水平的杂交信号。这些杂交信号可能会在阴性对照样本中产生一些背景噪音。

3. 实验技术问题：实验过程中可能存在一些技术问题，如杂交温度、探针浓度、杂交时间等的设置不准确，或者实验操作中的其他问题，这可能导致阴性对照样本出现一些非特异性信号。