卓娜
我的问题如下:
1、融合的时候脾细胞中红细胞较多,会有影响吗?
2、在脾细胞和骨髓瘤细胞混合离心后(1200 rpm,8min)细胞团块很紧实,吸干上清后,38°水浴让细胞松散,之后缓慢滴加PEG(50%)1 mL,细胞就成小块样,散不开。这种现象是正常的吗?
3、我的融合率很低,因为是预实验,用的都是普通小鼠,就融合前3天腹腔注射免疫了一次,这会导致融合率低吗?
4、有一些克隆感觉长3-5天就消失 ,目前没有用饲养层细胞,20%的血清+DMEM,请问会影响融合率吗?
多谢各位。
Eason老歌迷
杂交瘤操作对于无菌要求特别高,你的操作的全部过程必须在严格无菌的条件下进行,不然它的融合率会降低很多。而且细胞融合是杂交瘤产生的中心环节,这一步关系到全部工作的成败。
我可以给你一个小秘诀,就是我之前犯的错误,不能用含有蛋白的培养基配制PEG溶液。浓度低于30%的PEG融合成功率低,高于50%的PEG对细胞毒性大,然后细胞融合率上不去。