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基因转染(磷酸钙 -DNA 共沉淀法)
基因转染技术可以应用于:基因组功能研究(基因表达调控,基因功能,信号转导和药物筛选研究)和基因治疗研究。
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细胞瞬时转染
细胞瞬时转染可用于(1)观察目的基因功能(2)表达蛋白在某种细胞中的功能(短时间即可进行观察,但效应会很快丢失)。
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基于化学物质 ENU 的随机诱变技术
ENU 是一种烷化剂,它能在 DNA 上将乙基传递给氧或氮基,导致碱基错配或替换(主要诱发点突变,即在 A-T 碱基对替换)。ENU 已被成功地用于获取单基因的各种等位基因。这些措施包括等位基因功能,亚效等位基因功能的缺失,并获得功能突变。在单个位点等位基因系列进一步确定基因功能上是非常强大的。此外,表型驱动的 ENU 筛选提供了解析发育和生化途径的工具。
操作方法所属实验:基于化学物质 ENU 的随机诱变技术
piggyBac转座子系统诱变基因组
效率低、随机整合、制作成本高等技术瓶颈问题,从而成为研究小鼠基因功能的常用手段。方法原理转座子系统诱变基因组的基本原理是首先将转座子整合入基因组并造成相应的基因突变体,再从中筛选出具有某种特异表型的细胞或个体,进一步通过反式 PCR 技术检测转座子的插入位点,从而研究被突变基因的功能。基因组中的蛋白编码序列只有 2% 左右,单纯的转座子插入有可能插入内含子而不引起表型变化,因此通常采用基因捕获技术 (gene trapping),即在转座子载体的基础上加入启动子、报告基因、剪接供体
操作方法所属实验:利用转座子系统诱变基因组
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如何用 Metascape 做基因功能分析?

Metascape 是一个操作简单、功能强大的基因功能注释分析工具,能帮助用户将当前流行的生物信息学分析方法应用到批量基因和蛋白质的分析中,以实现对基因或蛋白功能的认知。与其他基因功能分析工具相比,Metascape 克服了常见的操作难上手、数据库缺乏更新造成的数据不准确,和结果不易理解的不足之处。所以不管对新手还是入门已久的同学来说,用 Metascape 做基因功能分析,绝对是不错的选择。一、Metascape 优点http://metascape.org/Metascape 集成了四

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基因功能研究思路详解之体外篇

刚进实验室的小萌新,总有一种天下风云出我辈的风范,两耳不闻窗外事,一心只想发CNS。基因功能研究是当前生命科学和基础医学各领域的研究热点,也是每年高分文章层出不穷的领域。在基因功能研究中常用两种基础策略,功能减弱或缺失,功能增强或获得。 那么要如何研究一个基因的功能呢?实现基因Loss of function,CRISPR/Cas9基因敲除和RNAi干扰表达,哪种调控方式更好?移码突变和片段敲除哪个能更好的破坏目的蛋白的功能结构域?实现基因Gain of function,过表达和基因

文章资讯790 阅读
cDNA 文库构建
cDNA文库构建可以:(1)用于分离全长基因进而开展基因功能研究;(2)筛选目的基因并直接用于表达;(3)提供构建分子标记连锁图谱的所用探针。
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基于化学物质 ENU 的随机诱变技术
ENU 是一种烷化剂,它能在 DNA 上将乙基传递给氧或氮基,导致碱基错配或替换(主要诱发点突变,即在 A-T 碱基对替换)。ENU 已被成功地用于获取单基因的各种等位基因。这些措施包括等位基因功能,亚效等位基因功能的缺失,并获得功能突变。在单个位点等位基因系列进一步确定基因功能上是非常强大的。此外,表型驱动的 ENU 筛选提供了解析发育和生化途径的工具。
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技术和方案21 EMS诱变
不同而变化的。在诱变过程中存活的细胞相对于未诱变的对照细胞通常突变频率会增加 102~103(Lindegren et al.1965),建议通过预实验校正 EMS 诱导的死亡率和突变频率。有一些简单的测试能够分析突变频率,也许最有效的方法就是分析 CAM 基因的功能缺失。CAM 基因功能缺失能使细胞对刀豆氨酸产生抗性(Whelan et aL 1979),因此可将 EMS 处理后和未处理的培养物涂布在含有刀豆氨酸的平板(附录 A) 上,从而分析对刀豆氨酸抗性的细胞。另一种方法就是检测因特
操作方法所属实验:酵母遗传学方法实验
过表达细胞株的构建
过表达细胞株的构建指的是通过生物、化学、物理等细胞转染手段将某个特定基因的表达水平保持稳定的提高,从而实现在该细胞系中特定基因或蛋白功能增强。基因过表达作为一种传统的分子生物学技术,被认为是研究基因功能的实验策略之一,至今依然在生物学研究中发挥着重要作用。
操作方法所属实验:基因过表达构建实验
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基因功能研究第一步:轻松敲基因

基因研究中,敲除基因,研究该基因的功能是最常用的套路。一般 ShRNA 可通过 RNA 干扰来抑制基因的表达, 是基因研究中必不可少的环节。下面就主要围绕设计 ShRNA 引物序列,手把手教你构建 ShRNA 质粒,轻松敲基因。ShRNA 的设计原则1. 克隆到 ShRNA 表达载体中的 ShRNA 包括两个短反向重复序列,中间由一茎环序列分隔的,组成发夹结构,由 polⅢ 启动子控制。随后在连上 5~6 个 T 作为 RNA 聚合酶 Ⅲ 的转录终止子。2. 两个互补的寡核苷酸两端须带有

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【原创】基因功能研究策略

随着人类基因组计划的顺利进行,越来越多的新基因被发现,基因功能研究成为生命科学领域中的重大课题,目前基因功能研究方法主要有基因转导、反义技术、转基因和基因剔除、染色体转导、RNA 干涉等。一、 正常情况:DNA→mRNA→蛋白质→功能(遗传效应以及表型)二、 基因功能研究策略:1、基因功能的获得(gain-of-function)如:GFP转基因鼠1)、基因转移(transgenic):(1)、 指外源基因导入受体细胞后能随即整合到受体的染色体中,而相对稳定地表达,通过观察

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siRNA 表达载体的构建
siRNA表达载体构建可应用于:(1)作为后基因组时代基因功能分析的有力工具;(2)基因组学、细胞信号传导通路分析;(3)药物靶点筛选、疾病治疗。
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RNA 介导的基因沉默实验
通过转录后水平基因沉默(PTGS) 使内源基因下调表达是鉴定植物基因功能的一把钥匙。在植物、真菌和动物界不同的物种中已经发现许多基于 RNA 水平的沉默机制,如转录后水平基因沉默、共抑制、基因压制和 RNA 干扰(RNAi ) 。其中,RNAi 是最令人感兴趣的发现之一。
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SB转座子系统诱变基因组
效率低、随机整合、制作成本高等技术瓶颈问题,从而成为研究小鼠基因功能的常用手段。方法原理转座子系统诱变基因组的基本原理是首先将转座子整合入基因组并造成相应的基因突变体,再从中筛选出具有某种特异表型的细胞或个体,进一步通过反式 PCR 技术检测转座子的插入位点,从而研究被突变基因的功能。基因组中的蛋白编码序列只有 2% 左右,单纯的转座子插入有可能插入内含子而不引起表型变化,因此通常采用基因捕获技术 (gene trapping),即在转座子载体的基础上加入启动子、报告基因、剪接供体
操作方法所属实验:利用转座子系统诱变基因组
T接头介导PCR在转基因动物外源基因定位中的应用
T 接头介导 PCR 在转基因动物外源基因定位中的应用是分析外源基因的整合部位,获取高表达整合位点,同时也是对插入位点基因功能及表达调控研究的有效方法。
操作方法所属实验:PCR在动物学中的应用
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