RNA 介导的基因沉默实验

植物学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

通过转录后水平基因沉默（PTGS) 使内源基因下调表达是鉴定植物基因功能的一把钥匙。在植物、真菌和动物界不同的物种中已经发现许多基于 RNA 水平的沉默机制，如转录后水平基因沉默、共抑制、基因压制和 RNA 干扰（RNAi ) 。其中，RNAi 是最令人感兴趣的发现之一。

来源：《麦类作物转基因技术与田间鉴定实验指南》

操作方法

RNA介导的基因沉默

一、筛选目的基因片段的参数 1. 序列 ( 1 ) 构建一个指定的 RNA 沉默载体首先要进行生物信息学分析。根据目的基因对应的已知 cDNA 序列或预测的基因序列设计引物，用反转录-PCR ( RT- PCR) 方法扩增 cDNA 上的一部分序列。如果没有目的基因的基因组序列，可以用其他物种中基因的序列去搜索已知序列的 cDNA。如果目的基因是多基因家族的成员，就需要与家族成员进行多重比较以