,对某些传染病如甲型肝炎有较高的临床诊断价值。 抗原抗体反应 1. 可逆性 抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡,其反应式为: Ag+Ab→Ag·Ab 抗体的亲和力(affinity)是抗原抗体间的固有结合力,可以用平衡常数K表示: K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab] Ag·Ab 的解离程度与K值有关。高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合,两者结合牢固,不易解离。解离后的抗原或抗体均能保持原有的结构和活性,因此可用亲和层析法来提纯抗原或抗体。在抗
1、变性温度和时间: 模板 DNA 和 PCR 产物的变性不充分是 PCR 失败的主要原因。适宜的变性条件是 95℃ 30s 或 97℃15s。变性不完全,DNA 双链会很快复性,因而减少产量。在变性中,温度太高或反应时间过长,会导致酶活性的损失。Taq DNA 聚合酶活性的半寿期:92.5℃为 2h 以上,95℃为 40min,97℃为 5min。 2、复性温度和时间: 复性温度决定 PCR 的特异性,而引物退火温度和所需时间长短取决于反应体系中的基本组成及扩增引物的长度和浓度,实际使用
可溶性抗原与相应的抗体混合,在电解质存在的条件下,两者比例适合,即可有沉淀物出现,叫沉淀反应(Precipitation).由于沉淀反应抗原多系胶体溶液。沉淀物主要是由抗体蛋白所组成。 为了求得抗原与抗体的适宜比例,保证有足够的抗体,而且抗原分子小,具有较大的反应面积,因此操作上通常是稀释抗原,不稀释抗体。 沉淀反应的种类有环状沉淀、絮状沉淀、荚膜膨胀、琼脂扩散及免疫电泳等。此外还有放射性同位素标记、酶标
基于基因芯片的酶反应方法 在ASO的基础上,又衍生出了一些基于基因芯片的酶反应方法,用于SNP的分析。与直接杂交法不同的是,基于酶 学方法的基因多态性检测允许探针的3’端或近3’端设计突变碱基。一旦探针的3’端和靶基因序列互补,连接酶和多聚酶能够引导序列的延伸,这种特性可以用来区分不同靶基因的序列。这种方法被称为酶催化的延伸法,主要有引物延伸法和连接酶检测反应。基于这两种方法又发展了其他的基因芯片基因多态性检测手段,这里只介绍上述两种方法。 (1)引物延伸法