沉淀反应（Precipitation）实验

可溶性抗原与相应的抗体混合，在电解质存在的条件下，两者比例适合，即可有沉淀物出现，叫沉淀反应（Precipitation）.由于沉淀反应抗原多系胶体溶液。沉淀物主要是由抗体蛋白所组成。
为了求得抗原与抗体的适宜比例，保证有足够的抗体，而且抗原分子小，具有较大的反应面积，因此操作上通常是稀释抗原，不稀释抗体。
沉淀反应的种类有环状沉淀、絮状沉淀、荚膜膨胀、琼脂扩散及免疫电泳等。此外还有放射性同位素标记、酶标记等测定法。
（一）环状沉淀反应
当抗原与相应抗体形成一个接触面时，如二者比例适当，接触面上可形成一个乳白色的环状物即为阳性沉淀反应。
材料：
1.免疫血清：免疫兔抗人血清
2.抗原：人血清
3.小沉淀管、毛细吸管、橡皮头、生理盐水。
方法：
1.取小沉淀管2只，以毛细吸管吸取抗人血清约0.2毫升，加入第一管，加时注意不能有气泡。
2.以毛细吸管吸取生理盐水0.2毫升加入第二管。
3.用毛细吸管吸入血稀释0.2毫升加入各管，加时应注意使抗原溶液缓缓由管壁流下，轻浮于血清面上，使成一明显界面，切勿使之相混。
4.置室温中10—20分钟，观察液面有无乳白色沉淀环，若有则为阳性。

（二）.琼脂扩散试验
琼脂扩散是抗原抗体在凝胶中所呈现的一种沉淀反应。
抗体在含有电解质的琼脂凝胶中相遇时，便出现可见的白色沉淀线。这种沉淀线是一组抗原抗体的特异性复合物。如果凝胶中有多种不同抗原抗体存在时，便依各自扩散速度的差异，在适当部位形成独立的沉淀线，因此广泛地用于抗原成分的分析。琼脂扩散试验可根据抗原抗体反应的方式和特性分为单向免疫扩散、双向免疫扩散、免疫电泳、对流免疫电泳、单向及双向火箭电泳试验。
（1）单向琼脂扩散试验
材料：
1．诊断血清（抗体：抗人IgG或IgA免疫血清）
2．待检血清（抗原）：人血清
3．参考血清：全国统一人血清免疫球蛋白参考血清（批号不同，免疫球蛋白含量不同）。
4．其它：生理盐水、琼脂粉、微量进样器、打孔器、玻璃板、湿盒等。
方法：
1．将适当稀释（事先滴定）的诊断血清与予溶化的2%琼脂在60℃ 水浴 预热数分钟后等量混合均匀制成免疫琼脂板。
2．在免疫琼脂板上按一定距离（1.2—1.5厘米）打孔，见图1。
3．向孔内滴加1：2，1：4，1：8，1：16，1：32稀释的参考血清及1：10稀释的待检血清，每孔10微升，此时加入的抗原液面应与琼脂板一平，不得外溢。
4．已经加样的免疫琼脂板置湿盒中37℃温箱扩散24小时。
5．测定各孔形成的沉淀环直径(mm),用参考血清各稀释度测定值绘出标准曲线，再由标准曲线查出被检血清中免疫球蛋白的含量。