材料与仪器
磷酸肌酸 肌酸磷酸激酶 ATP GTP
微量离心管
微量离心管
步骤
1. 将反应混合物加入一在冰上放置的微量离心管中。能量重建系统成分如下：
5 mmol/L 磷酸肌酸
20 单位/ml 肌酸磷酸激酶
0.5 mmol/L ATP
0.5 mmol/L GTP
2. 滴一滴孵育混合物到一片位于带盖子的湿盒中的封口膜上。将带有通透细胞的盖玻片上多余缓冲液吸去。倒置于孵育液滴上。对所有样品， 重复该步骤。对于悬浮培养细胞，可在一微量离心管中反应，细胞可以通过离心和用新鲜的转运缓冲液重悬浮来清洗。
3. 所有样品都放好以后，盖上盒子，在 30℃ 水浴中孵育 30 分钟。
4. 在孵育的最后，用转运缓冲液漂洗细胞。于室温用 2% 甲醛/转运缓冲液固定 10 分钟。
5. 在含有 0.1% 苯二胺的转运缓冲液中，将盖玻片放到载玻片上。用指甲油封边，在荧光显微镜下观察。
5 mmol/L 磷酸肌酸
20 单位/ml 肌酸磷酸激酶
0.5 mmol/L ATP
0.5 mmol/L GTP
2. 滴一滴孵育混合物到一片位于带盖子的湿盒中的封口膜上。将带有通透细胞的盖玻片上多余缓冲液吸去。倒置于孵育液滴上。对所有样品， 重复该步骤。对于悬浮培养细胞，可在一微量离心管中反应，细胞可以通过离心和用新鲜的转运缓冲液重悬浮来清洗。
3. 所有样品都放好以后，盖上盒子，在 30℃ 水浴中孵育 30 分钟。
4. 在孵育的最后，用转运缓冲液漂洗细胞。于室温用 2% 甲醛/转运缓冲液固定 10 分钟。
5. 在含有 0.1% 苯二胺的转运缓冲液中，将盖玻片放到载玻片上。用指甲油封边，在荧光显微镜下观察。
来源：丁香实验
