磷酸化蛋白总是跑出来双条带，但文献上就没有双带，已经用超声裂DNA了，但还是有双带

很正常，一方面是很多一抗孵育后，都是多条带的，本身就这样，我见过两条带，三条带的，有很多一抗说明书会说的。另外一方面，是你买的一抗特异性不强，很容易做出多条带，我做出过七八条带的图，很多样品和一抗结合并不特意，主要看你目标条带跑出来没有。

做WB实验，很难做出像内参一样的条带，那么单一，大都数都是带有杂带的。

以下是一些建议来帮助您解决这个问题：

1. 优化超声条件：尝试调整超声处理的条件，例如改变超声功率、超声时间或超声间隔。不同样品可能对超声条件有不同的敏感性，因此您可能需要进行一系列的实验来找到最适合您的样品的超声条件。

2. 改变DNA裂解方法：除了超声裂解，您还可以尝试其他的DNA裂解方法，如化学裂解或热裂解。不同的裂解方法可能对DNA产生不同的效果，尝试不同的方法可能有助于解决双条带问题。

3. 优化电泳条件：检查您的电泳条件，包括电泳缓冲液的配制、电泳时间和电流设置。确保您的电泳条件符合最佳分离和检测磷酸化蛋白的要求。

4. 验证双条带来源：使用其他方法来确认双条带的来源。例如，您可以尝试使用不同的抗体或其他蛋白检测方法，如免疫印迹（Western blotting），以确定磷酸化蛋白的存在和磷酸化状态。

双带可能是形成二聚体或者蛋白降解了，建议先纯化后再跑