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原代肠道上皮细胞培养

相关实验:🔥 原代细胞培养实验

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睡觉大王小张

请问有朋友做过原代小肠上皮细胞体外培养实验吗,方便分享一下经验和方法嘛,谢谢!

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4 个回答

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sswei

有帮助

最重要的是注意污染,肠道本身细菌比较多,必须保持无菌操作,以避免细胞被细菌、真菌等微生物污染。

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高山云初

有帮助

步骤

 

(1)C57BL/6 小鼠颈椎脱臼处死,喷适量酒精,滴加适量 Buffer 快速分离结肠;

 

(2)沿肠系膜剪开,DMEM 培养基清洗去除肠腔内容物;

 

(3)无菌剪刀将结肠组织剪成 1mm3 左右碎片;

 

(4)10 mL 0.1% 胶原酶 I 和 3% 分散酶 II 消化组织,37℃,摇床消化 25 min;

 

(5)吹打混匀,100 μm 细胞过滤器过滤,收集上清;

 

(6)相差消化法、差速贴壁法去除成纤维细胞;

 

(7)加入 1 mL 培养基重悬细胞,接种于培养瓶完全培养基中,37℃,5% CO2 细胞培养箱中培养;

 

(8)细胞长至培养瓶 80-90% 后用 5 g/L 的胰酶消化液消化,接种于细胞培养板。

 

常见问题

 

1. 实验前所有器械消毒,高压灭菌,液体无菌过滤;

 

2. 酶消化液现用现配;

 

3. 实验中注意充分消化以保证检测细胞量足够;

 

4. 尽可能充分去除成纤维细胞;

 

5. 用于后续培养需保证全程无菌操作。

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huarenqiang5

有帮助

可以借鉴一下下面这个文献参考:




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有帮助

原代肠道上皮细胞培养的方法文献如图


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