正常晶状体上皮细胞原代培养

实验材料：

1. 材料来源：人眼、兔眼或者猪眼等；

2. 清洗液：不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2；

3. 器械：无齿显微小镊子2把、培养板和培养皿若干；

4. 培养液：为含15%胎牛血清的DMEM培养液；

实验方法：

1. 取材

① 摘取动物或人的供体眼球，作常规消毒处理；

② 用刀片沿角巩膜缘环形剪开眼球，除去角膜和虹膜，并用角膜剪刀剪断晶状体悬韧带，取出晶状体，置于培养皿中；

③ 用PBS液洗去黏附在晶状体表面的虹膜色素及玻璃体。弃去洗液；

④ 将晶状体的凸面向下，用4号针头于晶状体赤道部稍靠后的部位环刺一圈，然后用两把无齿显微镊子轻轻分离出晶状体前囊膜；

2. 原代培养；

① 取下晶状体前囊膜后，一般不经洗涤。将其剪成余额1.5mm×1.5mm的植块；

② 用无齿显微镊子挑起植块，平贴于培养板中；

③ 置于37℃恒温箱中约5min，待组织块稍干后便可加入培养液；

④ 按常规方法培养。每周换培养液2次，每次更换2/3的培养液量；

3. 传代培养：

在培养细胞基本融合形成单层时即需传代。否则细胞会因生存空间不足或由于细胞密度过大而致营养不足。按常规方法进行传代培养；