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正常滑膜细胞原代培养

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3404

实验材料:

1. 实验动物:大鼠、兔,人手术切除的关节等;

2. 清洗液:不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS,添加100IU/ml青霉素、100µg/ml链霉素,pH7.2;

3. 培养液:RPMI1640培养基,补加15%小牛血清;

实验方法:

1. 将大鼠处死后,用75%酒精消毒;

2. 用手术剪剖开其四肢皮肤与肌肉,暴露长骨两端的关节,取出关节面滑膜组织置于盛有缓冲液的培养皿中;

3. 剔除滑膜组织外层结构及周边软骨组织,用缓冲液洗2—3次;

4. 将滑膜组织置于盛有少量小牛血清的培养皿中,剪碎成1mm×1mm×1mm大小的植块;

5. 将制备的植块接种到螺旋口培养瓶中。反转培养瓶,使植有组织块的一面朝上,加入培养液,盖好瓶盖。将培养瓶放入含5%CO2的培养箱中在37℃条件下进行培养;

6. 培养4h后,组织块较牢黏附于瓶底时,再轻轻反转培养瓶,继续培养;

7. 培养3d后换培养液。

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