为什么我的细胞原代培养总是失败？

1：防污染意识欠缺

2：器材灭菌不彻底

手术器械混用后，没有进行高温湿热灭菌（121℃/25min以上），因为单纯的紫外照射消毒压根不能排除污染源，另外，打开包装的离心管、EP管、枪头等，超过一周以上未及时重新灭菌，细胞实验最忌讳的就是怕麻烦和懒，一定要勤于清洗和灭菌实验器材。

3：原代材料处理不当

实验所用细胞原代培养的动物，进入紫外传递箱之前，没有进行75%乙醇浸泡消毒，而且获取相应的组织时，解剖手法欠佳，造成出血过多，此外分离的组织未能及时放置在冰上，这些看起来不起眼的因素都会大大影响实验的成败与否。

4：细胞消化条件不佳

培养的是原代神经细胞相对于内皮细胞、成纤维细胞等，更易遭受胰酶的消化损伤，所以要认真调研，挑选正确的消化酶，胶原酶和木瓜酶就比较适合神经元，同时严格控制消化时间，建议每隔5min镜下动态观察。

5：细胞换液操作太频繁

培养了两天的原代细胞，好不容易适应了微环境，局部分泌了一些促进生长的内源性因子，突然换液，细胞又要重新适应新的环境，于是死的死、伤的伤。

6：细胞培养液PH值过碱

每种细胞偏嗜的酸碱度都不一样，大部分原代细胞一般都适合在弱酸性环境下生长，然而实验过程中，经常要将培养液预热至37℃，反复操作易将其内的碳酸氢钠分解，最后导致培养液变紫色，PH值不断升高，这时候只需将培养液瓶盖打开，置于细胞培养箱中1-2小时，用二氧化碳调节即可，既环保又无公害。

原代细胞就是比较难养，多摸索条件吧

原代细胞培养的流程大致包括：细胞复苏、传代培养及冻存。每个步骤的缺陷都会造成失败，大致要注意污染，温度营养等多方面细节，可以提高原代培养率

细胞原代培养的成功与多个因素有关，以下是一些可能导致细胞原代培养失败的常见原因：

1. 细胞来源和组织处理：细胞的来源和组织处理可能会影响细胞的活力和成功率。确保使用新鲜的组织样本，并且在处理过程中注意避免对细胞造成损伤。

2. 细胞密度和接种密度：细胞密度和接种密度的选择对细胞原代培养的成功至关重要。密度过低可能导致细胞无法正常生长，而密度过高可能导致细胞聚集和缺氧。确保根据细胞类型和实验要求选择适当的细胞密度和接种密度。

3. 细胞培养基和培养条件：细胞培养基的配方、pH值、温度和培养条件等因素对于细胞原代培养至关重要。确保使用适当的培养基和培养条件，为细胞提供适合其生长和增殖的环境。

4. 污染：细胞培养中的细菌、真菌或其他细胞污染可能导致原代培养的失败。注意采取严格的无菌技术，并定期检查培养物是否受到污染。

5. 时间因素：不同类型的细胞可能需要不同的时间来适应和扩增。一些细胞可能需要更长的时间来建立原代培养。耐心等待，并适当调整培养条件。