坤坤爱篮球
最近在养内皮细胞,打算用氧化低密度脂蛋白处理,但是细胞总是成团贴壁怎么办,这样可以加药处理吗,会对实验结果有影响吗
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常见几点原因及建议:
1.消化的过程过于粗暴,吹打太用力,消化过久,消化液太强或有毒性等会导致细胞死亡。细胞死亡后会释放出DNA,缠绕其他细胞,形成黏性的细胞团。
2、细胞离心速度过大或时间太长,也容易造成细胞抱团。
3、消化不完全的时候,细胞和细胞之间的连接没有分开;消化过度的时候,圆形的细胞容易聚堆,再分开很困难。
4、状态不好、老化的细胞,也可能会出现抱团生长的情况(比如换液不及时、长得太满才传代、污染等造成的细胞状态差)。
5、传代时没有吹打均匀,细胞团多,培养时就会是一团一团的。
6、非震荡培养或细胞量过多的话就会成团。
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如果你培养的细胞是悬浮细胞,如Jurkat细胞,它生长时就是会成团的,而且会越来越大。如果培养的是贴壁生长的细胞,出现抱团,也要分情况。
1 如果细胞正常生长,且未长满,只是部分细胞抱团互相叠在一起,那最大的可能就是在上一次消化细胞时,没有把细胞悬液彻底吹散,有部分细胞团块直接种下去培养瓶内了,因此会出现这种情况,对应的解决办法就是等下一次消化时,用移液器彻底吹散细胞悬液,然后再种细胞到培养瓶内。
2 如果细胞生长不正常,例如很多细胞都成团了,且浮起来了,那大概率是被污染了,那些成团的细胞是死掉的细胞,或者是微生物团块。此时没有挽救的办法,只能扔弃。
3 如果细胞生长正常,且长满,出现部分细胞堆叠在一起,成团了,那说明培养空间不足了,细胞只能叠在一起生长,这种情况比较罕见,因为只要细胞长满瓶底,就会发生接触抑制,一般是不会再继续长的。
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建议可以考虑以下几点:
1. 优化细胞培养基成分,如适当增加细胞粘附因子等,改善细胞生长状态。
2. 调整细胞种植密度,过稀或过密都会导致细胞聚集。需测试最佳密度。
3. 更换细胞培养皿/瓶,不同表面处理也会影响细胞贴壁。可测试不同材质。
4. 改进传代技术,避免细胞聚集过度。适当洗涤分散细胞。
5. 观察是否存在污染现象。严格按无菌操作流程,更换无菌器具和试剂。
6. 如果聚集不严重,可直接给予干预。但要监测细胞状态,如出现大量死亡则需终止。
7. 聚集严重时,建议先传代或更换细胞批次,恢复正常生长状态后再进行实验。
8. 重复实验时控制条件尽可能一致。结果差异可能由聚集状态引起。
希望以上建议可以帮助您解决细胞培养中的聚集问题,祝实验顺利!
feixue7758527w
贴壁细胞总是成团贴壁,很可能的原因还是因为胰酶用量不够或者吹打不均匀造成的,对细胞实验还是会有影响的,不建议这样实验。