nzeng
根据jove上的操作以及通过其他protocol,提取到的滋养层细胞纯度非常低。细胞提取后预渡,但成纤维细胞含量后期流式分析得出大概90%。特别困惑,特此求助各位大神!!!有没有人做过呢?
sswei
磁选法:利用磁珠与特定抗体的结合来实现对目标细胞的选择性分离,较为快速和简便,但需要针对磁珠和抗体进行选择和优化。
差速离心分离法:将组织通过差速离心,可以分离出不同密度的细胞,能够获得特定组织的细胞,但相较于其它方法分离效率较低。
loveliufudan
对于小鼠原代滋养层细胞的提取和纯化,确保高细胞纯度是非常重要的。如果你在细胞提取后的滋养层细胞纯度非常低,以下是一些可能导致问题的因素和解决方法:
1. 细胞来源和种类:滋养层细胞可以包括多种不同的细胞类型,如成纤维细胞、内皮细胞等。确保你提取的细胞确实是目标滋养层细胞,并了解其特征和表型。如果成纤维细胞是主要成分,那么高百分比的成纤维细胞在流式细胞术中是合理的。
2. 细胞提取方法和处理:确保使用合适的细胞提取方法,并对细胞进行适当的处理。这包括酶消化、机械分散或其他相关步骤。注意使用合适的细胞培养基、酶和处理时间,以最大程度地提高目标细胞的纯度。
3. 细胞纯化方法:如果纯化滋养层细胞的目的是为了减少其他细胞类型的污染,可以考虑使用其他纯化方法,如密度梯度离心或负选择(通过抗体或细胞表面标记)。这些方法可以帮助分离目标细胞并减少其他细胞类型的干扰。
4. 细胞鉴定和分析:对于滋养层细胞的纯度分析,除了流式细胞术,还可以使用其他鉴定方法,如免疫染色或细胞特异性标记。这有助于确认目标细胞的纯度和识别其他细胞类型的存在。
龙大人驾到
小鼠原代滋养层细胞的提取和纯化是一个复杂的过程,可能涉及到多种因素。以下是一些可能导致低细胞纯度的原因:
细胞来源:滋养层细胞是从组织中提取的一种细胞类型,可能会受到组织来源、年龄、性别等因素的影响,这些因素可能会影响细胞的数量和纯度。
细胞提取方法:细胞提取的方法对细胞的纯度影响很大。如果提取方法不当,比如细胞破碎或者细胞损伤,就会导致细胞的纯度下降。
细胞培养条件:细胞培养条件对细胞的纯度也有很大的影响。如果培养条件不适合细胞的生长和繁殖,就会导致其他类型的细胞出现,从而影响细胞的纯度。
检测方法:细胞的纯度检测方法也可能会影响实验结果。不同的检测方法可能有不同的灵敏度和特异性,从而导致不同的细胞类型被识别出来。
由于成纤维细胞的含量高达90%,可以考虑以下可能的原因:
细胞提取方法不够优化,导致滋养层细胞和成纤维细胞一起被提取。
细胞处理过程中可能存在误差,导致细胞类型被错误地鉴定。
流式细胞分析的检测方法可能不够精确,无法对不同类型的细胞进行准确的区分。
dxyc42u
很可能是取材的问题,重新取材试一试