小鼠原代神经元活细胞成像观察自噬体运动

细胞转染后观察gfp-lc3，此时细胞分成两组，一组对照，另外一组饥饿诱导或者药物诱导，然后两组对比自噬情况。雷帕霉素药物诱导的效果会比饥饿诱导的效果好，建议先试一下

首先，关于小鼠原代神经元的自噬诱导方法，常用的方法包括饥饿、处理自噬诱导剂和添加氨基酸缺乏介质等。其中，EBSS是一种经常用来模拟饥饿状态的介质。除了EBSS，还可以使用其他的饥饿介质，例如HBSS和Krebs缓冲液等。

在您的实验中，您已经尝试了将Neurobasal培养基全部换成EBSS并加入自噬诱导剂，但是未能观察到GFP-LC3的移动。可能的原因有很多，下面我列举一些可能会影响实验结果的因素：

转染后的时间。转染GFP-LC3和目标蛋白A质粒48小时后，可能需要更长的时间才能观察到自噬体的形成。因此，建议您在转染后不同的时间点进行观察，例如24小时、72小时等。

自噬诱导剂的浓度。自噬诱导剂的浓度会影响自噬体的形成和自噬通路的激活。您可以尝试调整自噬诱导剂的浓度，找到最适合您的实验条件的浓度。

神经元的健康状况。神经元的健康状况可能会影响自噬体的形成。如果神经元受到了不良因素的影响，例如氧化应激和细胞凋亡等，可能会影响自噬体的形成和自噬通路的激活。因此，在实验中，建议您使用健康的神经元。

实验温度。温度对神经元的生长和自噬通路的激活也有影响。您可以尝试调整实验的温度，找到最适合您的实验条件的温度。

饥饿诱导自噬是目前成功比较高的方法，饥饿可以通过DNA损伤感受器Mec1调控能量匮乏诱导自噬，你可以延长饥饿时间，饥饿时间不足可能是自噬失败的原因

一般细胞饥饿处理4h可以诱导自噬，可以试一下延长饥饿的时间