原理
将组织切碎并浸洗，组织块接种于培养瓶或皮氏培养皿的表面，加入少量含高浓度血清（40 %~50 % ) 的培养基，表面张力使标本保持原位，直到它们自发地贴附于表面，随后细胞开始生长。
材料与仪器
生长培养基 皮氏平皿
镊子 手术刀 移液器 离心管 容器
镊子 手术刀 移液器 离心管 容器
步骤
1. 将组织移入新鲜、无菌 BSS 漂洗。
2. 移人第二个培养皿（25 cm2 培养瓶或 5~6 cm皮氏培养皿（组织培养级別），体积大小及生长培养基的使用量取决于所取组织的量 ，大约 100 mg 组织用 5 个25 cm2 的培养瓶）切除多余组织，如脂肪或坏死组织，再移入第三个培养皿。
3. 用手术刀交叉切成约 1 mm3 的小块。
4. 用移液管（10~20 ml 宽口吸头）将组织块移人 15 或 50 ml 无菌离心管或普通容器内（先用 BSS 或培养基湿润吸管，否则组织块易粘在吸管的内壁）。
5. 让组织块静置沉淀。
6. 用 DBSS（10 ml） 重悬冲洗组织块后静置，去除上清液，重复此步骤两次或更多。
7. 将组织块转移至培养瓶中（记住先湿润移液管），每个 25 cm2 培养瓶大约接种 20~30 块组织。
8. 吸去多余液体，每 25 cm2 生长面加入 1 ml 的培养基（生长培养基（如：DMEM 与 F12 等体积混合，再加 20 % 胎牛血清）），缓缓倾斜培养瓶将组织块均匀分布于生长面上。
9. 盖上瓶盖，放于培养箱或温室内，37°C 培养 18~24 h。
10. 若组织块已贴附，则可在未来 3~5 天内将培养基加至每 25 cm2 5 ml，以后每周更换一次，直到细胞已稳定生长。
11. 一旦向外生长已形成，可用镊子将外植物取出，用预先浸湿的移液管再转移至新的培养器皿中（而后回到步骤 7 再接种）。
12. 更换第一瓶的培养基直至细胞生长超过生长面积的一半，这时细胞可以传代了。
2. 移人第二个培养皿（25 cm2 培养瓶或 5~6 cm皮氏培养皿（组织培养级別），体积大小及生长培养基的使用量取决于所取组织的量 ，大约 100 mg 组织用 5 个25 cm2 的培养瓶）切除多余组织，如脂肪或坏死组织，再移入第三个培养皿。
3. 用手术刀交叉切成约 1 mm3 的小块。
4. 用移液管（10~20 ml 宽口吸头）将组织块移人 15 或 50 ml 无菌离心管或普通容器内（先用 BSS 或培养基湿润吸管，否则组织块易粘在吸管的内壁）。
5. 让组织块静置沉淀。
6. 用 DBSS（10 ml） 重悬冲洗组织块后静置，去除上清液，重复此步骤两次或更多。
7. 将组织块转移至培养瓶中（记住先湿润移液管），每个 25 cm2 培养瓶大约接种 20~30 块组织。
8. 吸去多余液体，每 25 cm2 生长面加入 1 ml 的培养基（生长培养基（如：DMEM 与 F12 等体积混合，再加 20 % 胎牛血清）），缓缓倾斜培养瓶将组织块均匀分布于生长面上。
9. 盖上瓶盖，放于培养箱或温室内，37°C 培养 18~24 h。
10. 若组织块已贴附，则可在未来 3~5 天内将培养基加至每 25 cm2 5 ml，以后每周更换一次，直到细胞已稳定生长。
11. 一旦向外生长已形成，可用镊子将外植物取出，用预先浸湿的移液管再转移至新的培养器皿中（而后回到步骤 7 再接种）。
12. 更换第一瓶的培养基直至细胞生长超过生长面积的一半，这时细胞可以传代了。
来源：丁香实验
