正常小鼠原代破骨细胞培养方案

实验材料：

1. 正常小鼠乳鼠颅盖骨组织 ；

2. 不含Ca 2+ 和Mg 2+ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2；

3. 0.1% Ⅰ 型胶原酶 ；

4. 培养器具：培养瓶或皿（ 用多聚赖氨酸包被） 、200目不锈钢网筛、眼科剪、镊子等；

培养方法：

1. 选用出生1-3天小鼠乳鼠，处死，放入75%酒精中浸泡2—3分钟，转至超净工作台内，取颅盖骨；

2. 将组织放入 含有1×PBS（pH7. 2 ） 中冲洗3次；

3. 用眼科剪将颅盖骨剪成 1 ×1 mm3 大小组织块 ，转至15ml离心管内，加入0.1%Ⅰ型胶原酶， 37℃ 水浴消化90min；

4. 加入含血清的培养基 ， 终止 酶反应 ；

5. 将消化后的组织过200目网筛， 收集 滤液 于 15ml 离心管中，1000rpm /min 离心10min，弃去上清，加入培养液重悬，染色计数细胞 ；

6. 调整细胞密度以 合适的密度 接种入培养瓶 ， 放置于37℃，5%CO2 培养箱中 培养。 待细胞长满瓶皿的生长表面即可传代；